РАСШИФРОВКА КЛИНИЧЕСКИХ ЛАБОРАТОРНЫХ АНАЛИЗОВ
Тест-системы для идентификации и дифференциации выделенных микроорганизмов
Биохимия. Ответы на тесты
В лабораторной практике идентификация видов и биоваров энтеробактерий проводится по их фенотипическим признакам. Основным и наиболее сложным разделом идентификации является изучение биохимических свойств бактерий. Повсеместно за рубежом и во многих лабораториях нашей страны биохимическая идентификация бактерий осуществляется микрообъемной технологией. При этом используются специальные микрообъемные тест-системы для автоматических бактериологических анализаторов или различные коммерческие тест-системы биохимической идентификации бактерий для визуального учета. Микрообъемная технология наиболее экономична, проста, пригодна для автоматизации и стандартизации исследований. Автоматические бактериологические анализаторы для микрообъемной биохимической идентификации бактерий и определения их чувствительности кантибиотикам производятся фирмой "Bio Merieux" Франция: Компания "Dade AG" США выпускает автоматические бактериологические анализаторы "Walk-Away", "Walk-Away" и полуавтоматический бактериологический анализатор "Auto SCAN-4". Применяются автоматические анализаторы других фирм: Quantum II, Cobas Micro. Указанные приборы имеют высокую стоимость, что ограничивает их применение. Коммерческие микрообъемные тест-системы по устройству представлены двумя группами: Результаты биохимических тестов учитываются визуально, вид микроорганизма устанавливается с помощью таблицы идентификации, кодов профилей или компьютерных программ. Среди тест-систем, основанных на принципе "субстрат в питательной среде" широко используются: API 20E "Bio Merieux" Франция ; Enterotest I и Enterotest 2, Enterotest 16, Entero-Screen АО "Lachema", Чехия , мультимикротесты ММТЕ I и ММТЕ 2 НПО "Аллерген" г. Ставрополь ; ПБДЭ НПО "Диагностические системы" г. Нижний Новгород ; "РАПИД-ЭНТЕРО - " и "РАПИД-ЭНТЕРО - 50" НИИЭМ имени Пастера, отдел новых технологий, г. К системам типа "субстрат в шаблоне носителя" относятся коммерческие тест-системы Micro - ID, Minitek, в которых субстрат и индикатор находятся на бумажных дисках, которые вносят в лунки планшетов с суспензией бактерий. Тест-система API 20E "Bio Merieux" Франция предназначена для биохимической идентификации энтеробактерий и других грамотрицательных палочек в течение 18 - 24 ч. Состоит из прозрачной полимерной пластинки с 20 микропробирками объемом 0,25 мл, содержащими дегидратированные субстраты для определения 20 тестов: Дополнительно вне панели определяют цитохромоксидазу, окисление и ферментацию глюкозы, подвижность. В состав комплекта входят также реактивы для определения индола, триптофандезаминазы, ацетоина, нитритов, оксидазы. Для исследования берут изолированную колонию со среды первичного посева, ставят пробу на оксидазу, готовят из колонии суспензию бактерий определенной мутности по шкале Мак-Фарланда. Вносят во все микропробирки по мкл суспензии бактерий, затем добавляют по 50 мкл вазелинового масла в микропробирки с тестами на уреазу, лизиндекарбоксилазу, орнитиндекарбоксилазу, аргининдигидролазу, сероводорода. Результаты учитывают визуально, заполняют бланки с кодами цифрового профиля. Идентификацию проводят по кодам или идентификационной таблице. Если на панели нет ферментации глюкозы и менее двух положительных прочих тестов, ставят ОФ тест, определяют подвижность и продлевают наблюдение еще 24 ч для выявления неферментирующих бактерий. Тест-система Rapid 20E Bio Merieux предназначена для биохимической идентификации энтеробактерий и других грамотрицательных палочек в течение 4 ч. Состоит из прозрачной полимерной пластинки с 20 микропробирками, содержащими дегидратированные субстраты для определения 20 тестов: Исследования проводят так же, как тест-системой API 20E. Вид бактерий идентифицируют по кодам. Тест-система Enterotest 1 и 2 АО "Lachema" предназначена для определения биохимической активности и идентификации наиболее важных энтеробактерий в течение 18 - 24 ч. Состоит из двух полимерных планшетов 8,5 х 12,5 см содержащих по 96 ячеек с высушенными питательными средами с субстратами для определения 23 биохимических тестов. Enterotest 1 для родовой идентификации позволяет определять 12 тестов: Enterotest 2 для видовой идентификации определяет 11 тестов: Делают высев суспензии для проверки чистоты культуры на кровяной агар. По мкл суспензии бактерий вносят во все 23 лунки двух планшетов, заливают вазелиновым маслом лунки тестов на лизин, индол, сероводород, орнитин, уреазу, аргинин. Затем вносят в лунки реактивы на индол, ацетоин, фенилаланин. Идентификацию проводят с помощью идентификационных таблиц. Система Enterotest 16 АО "Lachema" предназначена для идентификации наиболее значимых в медицине энтеробактерий в течение 18 - 24 ч. Состоит из двух рядов по 8 лунок стрипированного луночного планшета. В лунках содержатся вышеуказанные среды для определения 16 тестов: Имеются дополнительно идентификационные полоски Микро-Ла-Тест: Исследуют изолированные колонии со сред первичного посева Эндо, Мак-Конки. Проводят контрольный высев суспензии на чистоту на кровяной агар. Учитывают все тесты и заносят в бланки. Идентификацию проводят с помощью идентификационных таблиц или книг кодов. Система мультимикротестов Entero-Screen АО "Lachema" предназначена для ускоренной идентификации сальмонелл в пищевой промышленности и санитарно-эпидемиологической службе, для идентификации наиболее часто встречающихся энтеробактерий в моче или другом клиническом материале в течение 4 ч. Система представляет собой стрипированный полимерный планшет из 96 лунок, содержащий в каждом из 12 стрипов по 8 лунок вышеуказанные среды для 8 ключевых тестов: Дополнительно имеются бумажные полоски: Для обнаружения присутствия сальмонелл методом скрининга рекомендуется предварительно провести SALM test. Этот тест основан на выявлении С8-эстеразы по гидролизу 4-метилумбеллиферилкаприлата с образованием 4-метилумбеллиферрона, который выявляется при УФ облучении по синей флюоресценции. Исследуют колонию бактерий со среды первичного посева Эндо, Мак-Конки, но не висмут-сульфит агар. Добавляют в зону индикации полоски 10 мкл реактива SALM test, втирают петлей культуру в зону с реактивом, инкубируют в течение 10 - 15 мин. В контроле без посева культуры флюоресценция отсутствует. Штаммы с положительной реакцией подтверждают дальнейшим исследованием набором Entero-Screen. Следует отметить, что SALM test недостаточно специфичен: Для исследования системой Entero-Screen используют чистую культуру, выросшую на среде Эндо, Мак-Конки агаре или агаре с кровью барана. Проводят микроскопию с окраской по Граму и тест на оксидазу OXI test. Готовят суспензию 3-й степени мутности по Мак-Фарланду. Вносят по мкл суспензии бактерий во все лунки стрипа, добавляют парафиновое масло в лунки с лизином, орнитином, мочевиной, глюкозой, средой на индол. Добавляют реактивы на индол, ацетоин, фенилаланиндезаминазу. Учитывают результаты и идентифицируют культуры по таблице идентификации. Идентификацию бактерий из мочи дополняют использованием COLI test. Затем в пробирку с суспензией добавляют 4 капли реактива на индол при положительной реакции появится красное кольцо. Системы мультимикротестов ММТЕ 1 и ММТЕ 2 НПО "Аллерген" г. Ставрополь предназначены для идентификации наиболее распространенных энтеробактерий в течение 18 - 24 ч. Они представляют собой прозрачные полистироловые луночные планшеты, в лунки которых помещены субстратно-индикаторные среды, стабилизированные поливиниловым спиртом и стерилизованные ультрафиолетовым облучением. Система ММТЕ 1 для родовой идентификации позволяет определять 12 тестов: ММТЕ 2 дополняет ММТЕ 1 и служит для видовой идентификации по дополнительным 12 тестам: В состав набора входят также реактивы для соответствующих тестов. Выделяют чистую культуру на среде Эндо или кровяном агаре. Делают контрольный высев суспензии на кровяной агар для проверки чистоты культуры и дополнительных тестов. Вносят по мкл суспензии в каждую лунку систем, добавляют вазелиновое масло в лунки на индол, сероводород, уреазу, лизин, орнитин, аргинин. Затем вносят в соответствующие лунки реактивы на индол, фенилаланиндезаминазу, нитриты. Идентификацию проводят по таблице идентификации. Разработана компьютерная программа идентификации. Система ПБДЭ - пластина биохимическая, дифференцирующая энтеробактерии НПО "Диагностические системы", г. Нижний Новгород предназначена для биохимической идентификации энтеробактерий в течение 18 - 24 ч, представляет собой полимерную пластину с 20 лунками, содержащими высушенные среды с субстратами для 20 тестов: Пластина помещена в полимерный пенал. Исследуемую колонию со среды первичного посева отсевают на скошенный МПА, микроскопируют при окраске по Граму отсевают в пробирки со средой Олькеницкого и полужидким МПА на подвижность. Чистую культуру бактерий со скошенного МПА суспензируют в физиологическом растворе и вносят по мкл суспензии во все лунки пластины, добавляют в соответствующие лунки вазелиновое масло. Затем добавляют реактивы в соответствующие лунки и учитывают результаты. Результаты вносят в кодовую карточку. Идентификацию проводят по каталогу кодов. Тест-система "РАПИД-ЭНТЕРО - " НИИЭМ имени Пастера, отдел новых технологий, г. Санкт-Петербург предназначена для быстрой 4 ч биохимической идентификации наиболее часто встречающихся в медицинской практике видов энтеробактерий - возбудителей гнойно-септических и острых кишечных инфекций. Тест-система рассчитана на исследование культур бактерий. Комплект состоит из флаконов с полимерными капельницами, содержащих по 22 мл жидких дифференциальных сред; флаконов с капельницами, содержащих по 22 мл реактивов, и стерильных полистироловых луночных планшетов длямикротитрования однократного применения с крышками. Тест-система обеспечивает постановку 13 тестов: Исследованию подлежат чистые культуры, выросшие из отсевов колоний со сред выделения на секторах питательного агара или питательного агара с желчью. Предварительно определяют их возможную принадлежность к семейству энтеробактерий экспресс- тестом на цитохромоксидазу, тестом "тяжа" на грамотрицательные бактерии, ферментацию глюкозы на среде Клиглера. На среде Клиглера учитывают также газообразование при ферментации углеводов и образование сероводорода. Дальнейшему исследованию подлежат грамотрицательные, оксидазонегативные, ферментирующие глюкозу бактерии. Дифференциальные среды во флаконах готовы к немедленному использованию. Для их применения срезают ножницами с соблюдением стерильности верхний закрытый край полимерной капельницы и закрывают отверстие съемным колпачком капельницы. При исследованиях среда из флакона выдавливается по каплям путем надавливания пальцами на эластичные стенки капельницы. Дифференциальные среды вносят в планшеты по 4 капли мкл в лунку. Среды для одной культуры размещают в одном горизонтальном ряду из 12 лунок в постоянной последовательности в одной лунке с маннитом содержится и субстрат на нитратредуктазу. Количество рядов соответствует количеству культур, плюс один ряд контрольный без посева. Агаровую культуру изучаемых бактерий вносят по полной стандартной петле в каждую лунку со средой и размешивают. Петлю прожигают только в начале и конце посева на весь ряд. На поверхность сред с мочевиной, лизином и орнитином после посева вносят по 2 капли стерильного вазелинового масла. Предварительный учет результатов на среде с мочевиной проводят через 2 мин. Через 4 ч после посева добавляют в лунки реактивы на триптофандезаминазу, индол, нитратредуктазу и окончательно учитывают результаты визуально по изменения окраски сред. Результаты вносят в бланки регистрации. Идентификацию культур проводят по таблице идентификации. Это единственная отечественная тест-система ускоренной идентификации энтеробактерий. Она наиболее экономична, обеспечивает большой объем исследований, проста и надежна в использовании. Стоимость одного исследования существенно дешевле, чем всеми другими тест-системами. Для идентификации редких видов энтеробактерий, не предусмотренных тест-системами, применяют дополнительные тесты в соответствии с видовой характеристикой энтеробактерий, указанной в определителе бактерий Берджи см. Данные получены для срока инкубации 48 ч. Мир, с дополнениями. Выпускается также вариант тест-системы "РАПИД-ЭНТЕРО" на 50 исследований. Ускоренная идентификация энтеробактерий 4 часа микрообъемным методом в планшетах Обозначения: Y желтый; R красный; В коричневый; О оранжевый. ФБУН НИИ эпидемиологии и микробиологии имени Пастера Отдел новых технологий. Об отделе История института Методические рекомендации и обзоры Региональные потребители История Миссия Руководитель Печатные труды сотрудников Отдел сегодня Фотогалерея. Контакты Адрес Банковские реквизиты Обратная связь Новости Вопросы и ответы. Каталог товаров Иммуноферментные тест-системы Агглютинационные тесты РПГА, РТГА, РА Реагенты для окраски микроорганизмов и их идентификации Диски с противомикробными, противогрибковыми и индикаторными препаратами. Селективные среды, добавки и тест-системы для выделения, идентификации и определения антибиотикочувствительности микроорганизмов. Инструкции по применению Регистрационные удостоверения Информационные материалы.
ГОСТ Р 8.891-2015 Государственная система обеспечения единства измерений (ГСИ). Измерительные и индикаторные биохимические тест-системы. Технические и метрологические требования. Основные положения
Определение родовой, видовой и таловой принадлежности микроорганизмов на основании изучения морфологических, тинкториальных, культуральных, ферментативных и антигенных свойств — наиболее ответственная часть микробиологического исследования. Большое количество патогенов, принимающих участие в возникновении инфекционного процесса, обусловливает применение различных тестов по определению ферментативных свойств путем постановки большого количества биохимических реакций, что позволяет в комплексе с другими данными определить вид микроорганизма. Этот наиболее трудоемкий процесс выполняется в несколько этапов, требует большого количества дифференциально-диагностических сред, реактивов, посуды, что значительно удорожает стоимость анализа и удлиняет сроки его проведения. Результаты удается получить через 4…7 сут. Поэтому для идентификации микроорганизмов наиболее перспективны микрообъемные коммерческие тест-системы МТС. Они избавляют практических бактериологов от трудоемких и дорогостоящих процедур и позволяют получать стандартные, сопоставимые, воспроизводимые данные, экономят реактивы, ускоряют выдачу результата анализа. Коммерческие тест-системы для биохимической идентификации микроорганизмов различных групп представляют собой готовые к использованию полистироловые планшеты и панели с сухими дифференцирующими средами или субстратами, которые выпускаются разными производителями. Коммерческие тест-системы на основе полистироловых планшетов. В Российской Федерации наибольшее распространение получили следующие тест-системы. Махачкала для идентификации микробов. Они представляют собой контейнер из прозрачного полистирола, состоящий из 12 одинаковых ячеек, которые содержат сухие питательные среды с различными углеводами, многоатомными спиртами, аминокислотами, солями неорганических кислот и индикатором pH, стабилизированные поливиниловым спиртом. Перечень выпускаемых МТС для идентификации микроорганизмов, имеющих ветеринарное назначение, включает в себя МТС-МЕ биохимическая идентификация энтеробактерий , МТС-5У определение ферментативной активности энтеробактерий , МТС-С биохимическая идентификация стафилококков , МТС-Стреп биохимическая идентификация стрептококков , МТС-Л биохимическая идентификация листерий , МТС-Сальм биохимическая идентификация сальмонелл. Нижний Новгород ПБДБ для идентификации энтеробактерий и ПБДС для идентификации стафилококков. Системы на основе стандартных луночных микротитровальных планшетов для идентификации энтеробактерий ММТ-Е1 и ММТ-Е2 Ставропольская государственная медицинская академия. Наборы для ускоренной в течение 5 ч идентификации энтеробактерий РапидЭнтеро и РапидЭнтеро НИИЭМ им. Помимо вышеперечисленных используют и зарубежные диагностические системы для идентификации различных микроорганизмов в течение 3…48 ч: Диагностические полоски и диски для биохимической идентификации микроорганизмов. Системы индикаторные бумажные СИБ представляют собой полоски или диски из хроматографической бумаги, пропитанные соответствующим субстратом и индикатором и покрытые для стабилизации водным раствором поливинилового спирта. Реакцию ставят, как правило, пробирочным методом. В пробирку помещают 0,3 мл физиологического раствора или мясопептонного бульона, затем туда вносят петлей колонию изучаемого микроба и соответствующий диск. Учет реакции через 4…5 ч по изменению цвета бумажного диска. Срок годности СИБ составляет 1 год. СИБ по сравнению с МТС гораздо дешевле, зато работа с ними требует больше труда и времени. Диагностические полоски представляют собой пластмассовые полоски, на одном конце которых наклеена полоска индикации из фильтровальной бумаги, содержащей субстрат для выявления бактериального фермента или метаболита. В зависимости от типа полосок бактериальную культуру или наносят непосредственно на зону индикации полоски, или ее опускают в пробирку с исследуемой бактериальной суспензией и выращивают в течение определенного времени. Перечень выпускаемых диагностических полосок включает в себя: Диски из фильтровальной бумаги содержат определенные концентрации высушенных реагентов для выявления специфической бактериальной активности. Диски с бацитрацином 10 ЕД. Применяют для селективной изоляции Haemophilus spp. Тест основан на устойчивости Haemophilus spp. Диски с бацитрацином S. Тест основан на высокой чувствительности S. Предназначены для рутинной первичной индикации S. Принцип теста основан на избирательной чувствительности пневмококков к оптохину и резистентности к нему других зеленящих стрептококков. Общие правила работы с МТС. Методика проведения микробиологических исследований с использованием МТС должна полностью соответствовать прилагаемой инструкции. Общая схема работы с тест-системами состоит из следующих этапов. Для работы с МТС используют только чистые культуры. При их выделении особое внимание следует уделять качеству питательных сред. От этого зависит видовой состав изолированных микроорганизмов, их количество в исследуемом материале и успех идентификации. По результатам первичного посева и микроскопии проводят дифференциацию культур на грамположительные и грамотрицательные кокки и палочки. Суспензию готовят в рекомендованной суспензионной среде из чистой 18…часовой культуры определенной степени мутности согласно инструкции. Использование слишком густой или жидкой суспензии может привести к ложным результатам. Параллельно делают контрольный высев взвеси культуры на кровяной агар для проверки ее чистоты, ростовых свойств и или для постановки дополнительных тестов. Суспензию тщательно встряхивают; необходимый объем вносят в каждую лунку соответствующего ряда. После этого в определенные лунки для создания анаэробных условий добавляют по 2 капли стерильного вазелинового или парафинового масла. По окончании выращивания проверяют чистоту культуры по контрольному посеву. При отсутствии роста увеличивают время инкубации. Затем добавляют в определенные лунки необходимые реактивы, позволяющие визуализировать или усилить цветные реакции. Учет проводят визуально с помощью специальных таблиц, цветовых шкал и или цветных реакций контрольных штаммов и заносят их в бланки. Проводят с помощью таблиц биохимической активности, индексов профилей, книг-кодов или компьютерных программ. При окончательной идентификации учитывают дополнительную информацию микроскопия, характер колоний, наличие гемолиза, пигментообразование, подвижность и т. Строго соблюдать условия и сроки хранения в соответствии с инструкциями, прилагаемыми к тест-системам. Если культуру не удается идентифицировать, следует проверить ее чистоту и повторить исследование. При работе с тест-системами следует придерживаться следующих рекомендаций. Строго соблюдать правила работы с инфицированным материалом. При отсутствии роста на контрольной чашке необходимо увеличить время инкубации. Поделитесь ссылкой с друзьями Вконтакте. Сообщить об опечатке Текст, который будет отправлен нашим редакторам:
Вентилятор вр 80 75 2.5 характеристики
Как сделать фундамент под старым домом видео
Перевод текст text
Обозначения повреждений на японских аукционах
Виды химической связи в неорганической химии