Ссылка на файл: >>>>>> http://file-portal.ru/Результаты испытания бактериологического исследования препарата биор 1/
Методические указания по применению средства "БИ0Р-1" фирмы «БИОР» (Россия) для целей дезинфекции
Приказ Минздрава СССР от 22.04.1985 N 535
Биор-1
Микробиологические бактериологические исследования занимают важное место в общем комплексе клинико-лабораторных исследований, применяемых для профилактики, диагностики и лечения гнойно-воспалительных заболеваний и осложнений у больных в лечебно-профилактических учреждениях. Современная клиническая медицина предъявляет к микробиологическим бактериологическим исследованиям возрастающие требования по увеличению объема, повышению качества исследований, разработке и внедрению новых более совершенных методов. Это связано как с новыми научными достижениями в области эпидемиологии и бактериологии, так и с увеличением гнойно-воспалительных заболеваний, ростом госпитальных инфекций. Этиологическая структура возбудителей инфекционных процессов в последнее десятилетие изменилась: Возрастает роль неспорообразующих анаэробов и некоторых других видов микроорганизмов, роль которых в инфекционной патологии ранее была неизвестна. Принадлежность возбудителей гнойно-воспалительных заболеваний к условно-патогенным и сапрофитическим организмам существенно изменяет проведение и оценку микробиологических бактериологических исследований и требует новых методических подходов. Для развития микробиологических бактериологических исследований в клинико-диагностических лабораториях лечебно-профилактических учреждений необходимо дальнейшее совершенствование материально-технической базы лабораторий, расширение номенклатуры стандартных селективных питательных сред, стандартных наборов для экспресс-методов идентификации условно-патогенных микроорганизмов, агглютинирующих сывороток и увеличение выпуска некоторых видов оборудования. Требует совершенствования система заявок на бактерийные препараты для клинико-диагностических лабораторий. В целях совершенствования микробиологических бактериологических лабораторных исследований в лечебно-профилактических учреждениях, повышения уровня и эффективности микробиологической диагностики:. Методические указания по применению унифицированных микробиологических бактериологических методов исследования в клинико-диагностических лабораториях Приложение 1. Задание на разработку сухих питательных сред, тест-наборов, агглютинирующих сывороток для диагностики заболеваний, вызванных условно-патогенными микроорганизмами Приложение 2. Министрам здравоохранения союзных и автономных республик, заведующим краевыми, областными отделами здравоохранения, начальникам главных управлений здравоохранения Московского, Ленинградского, Киевского и Ташкентского горисполкомов и Московского облисполкома:. Главному управлению по производству бактерийных и вирусных препаратов тов. Главному аптечному управлению Министерства здравоохранения СССР тов. Главному управлению учебных заведений Министерства здравоохранения СССР тов. Контроль за выполнением настоящего Приказа возложить на Главное управление лечебно-профилактической помощи тов. Приложение 1 к Приказу Министерства здравоохранения СССР от 22 апреля г. Микробиологические методы исследования отделяемого женских половых органов. Микробиологические методы идентификации микробов рода стафилококка Staphylococcus. Микробиологические методы идентификации микробов семейства стрептококковых Streptococcaceae. Микробиологические методы идентификации микробов семейства нейссериевых Neissariaceae. Микробиологические методы идентификации микробов рода гемофилус Haemophilus. Микробиологические методы идентификации микробов рода коринебактерия Corynebacterium. Микробиологические методы идентификации микробов семейства энтеробактериевых Enterobacteriaceae. Микробиологические методы идентификации микробов рода псевдомонас Pseudomonas. Сепсис, бактериемию могут вызывать практически все микроорганизмы, относящиеся к патогенным и условно-патогенным микроорганизмам. Из последних наибольшее значение имеют: Staphylococcus aureus, Streptococcus pyogenes, Aerococcus viridans, Pseudomonas aeruginosa; представители родов: Klebsiella, Yersinia, Candida и другие. Кровь для посева следует брать, соблюдая правила асептики, для того, чтобы избежать попадания микроорганизмов из внешней среды. Посев необходимо проводить во время подъема температуры, в начале появления лихорадки. Кровь для посева следует брать до начала специфического антибактериального химиотерапевтического лечения, или, по крайней мере, через 12 - 24 часа после последнего введения препарата больному в зависимости от скорости выведения примененного препарата из организма. Следует учитывать также стадию заболевания с тем, чтобы взять кровь для посева в то время, когда предполагается бактериемия например, при брюшном тифе в первые 10 - 15 дней от начала заболевания. Для результативного бактериологического исследования необходимо сеять достаточные количества крови не менее 10 мл у взрослых и 5 мл у детей в большое количество жидких питательных сред. Это делается для того, чтобы путем разведения крови 1: Для взятия крови необходимо пользоваться стерильным шприцем. Системы для одноразового пользования или шприцы, простерилизованные в централизованной стерилизационной, освобождают от упаковки только непосредственно перед употреблением. При отсутствии централизованной стерилизационной надо прокипятить граммовый для детей граммовый шприц и соответствующие иглы с мандреном для венопункции в течение 30 - 45 минут в отдельном стерилизаторе. По окончании стерилизации слить воду и остудить шприц, не открывая стерилизатора. Собрать шприц с помощью стерильного пинцета, насадить иглу и вытащить мандрен. Нельзя пользоваться шприцем со "стерильного стола" в перевязочной, так как на нем могут оказаться бактерии из воздуха. По той же причине нельзя проверять проходимость простерилизованного шприца и иглы воздухом. Кровь на посев берут у постели больного или в перевязочной стерильным шприцем или системой для взятия крови одноразового пользования с соблюдением всех правил асептики и засевают тут же у постели больного. Взятие крови и ее посев осуществляют, как правило, два человека. Пока один человек обрабатывает кожу больного над пунктируемой веной, пунктирует вену и берет кровь, другой - над пламенем спиртовки открывает пробки флаконов, подставляет флаконы со средой под струю крови из шприца или системы, обжигает горлышки и пробки флаконов и закрывает их. Рекомендуется производить посев крови на несколько питательных сред, чтобы обеспечить возможность роста максимально большему числу возможных возбудителей. Минимально следует использовать две среды: Кровь засевают в жидкую часть среды. Флаконы ежедневно просматривают, при этом, наклоняя флакон, смачивают поверхность скошенного агара бульоном. Это исключает необходимость высева на плотные питательные среды и, следовательно, уменьшает риск загрязнения при пересевах. Эту среду следует обогатить, добавив дрожжевой экстракт до 20 г на 1 литр не менее 15 г и агар до 5 г на 1 литр не менее 4,25 г. Добавляют к среде 0, г резазурина - индикатора кислорода. Анаэробные условия контролируют по розовому окрашиванию среды. Однако, эту операцию можно производить только один раз. Среда дает возможность получить рост некоторых анаэробных и полуанаэробных микроорганизмов. В этот флакон пинцетом опускают стеклянный стаканчик или пробирку длиной 70 мм и диаметром 20 - 22 мм, в которой находится 12 мл концентрированной питательной среды: Стерилизуют 30 минут при 0,5 атм. Для получения гемокультуры в "среде со стаканчиком" в агаризованную воду помещают 3 - 5 мл крови. Оставляют флакон при комнатной температуре на 30 - 40 минут для гемолиза форменных элементов крови. Затем, наклоняя флакон, выливают содержимое стаканчика в водный раствор с кровью, флакон ставят в термостат. Посев гемолизированной крови позволяет выявить бактериемию в ряде случаев, тогда когда на других средах роста нет. Высвобождение микроорганизмов, адсорбированных на эритроцитах или подвергшихся незавершенному фагоцитозу, а также снижение антибактериальной активности гемолизированной крови, делает эту среду особенно ценной при заболевании, для которого характерна незавершенность фагоцитарной реакции. Во флаконы сеют 5 мл и 3 мл крови соответственно количеству среды см. Разливают во флаконы по - мл, стерилизуют при 0,5 атм. В жидкую среду Сабуро засевают 3 - 4 мл крови. Просматривают ежедневно в течение первых 8 дней. При появлении видимого роста делают мазки, окрашивают их по Граму, и, в соответствии с данными бактериоскопии, делают высевы на среды для определения чувствительности к антибактериальным препаратам и проводят идентификацию выделенных бактерий. При подозрении на анаэробную флору делают параллельные высевы для культивирования в аэробных и анаэробных условиях. Выращенные бактерии идентифицируют, определяют их свойства, чувствительность к антибактериальным препаратам, фагам и т. При отсутствии роста на 9 - 10 день дают отрицательный ответ. Однако флаконы с засеянной средой выбрасывать не рекомендуется. Необходимо продолжать держать их в термостате в течение 4 - 6 недель, проверяя появление роста 2 - 3 раза в неделю. За это время может быть выявлен замедленный рост персистирующих бактерий, бактерий в L-форме и т. При отсутствии на средах видимого роста микроорганизмов в первые двое суток следует особенно строго соблюдать правила, обеспечивающие стерильность, так как возможность попадания посторонней флоры во время повторных пересевов возрастает с каждым последующим пересевом. При наличии роста результаты оцениваются в зависимости от вида выделенных бактерий, скорости и массивности роста. Рост на всех используемых средах, в большинстве случаев, должен быть расценен как явная бактериемия, если нет оснований считать, что во время взятия крови произошло загрязнение бактериями внешней среды. При соблюдении всех правил асептики, выделение даже таких "непатогенных" видов как эпидермальный стафилококк или кишечная палочка следует считать проявлением бактериемии. У целого ряда больных, для которых характерно понижение иммунореактивности организма у онкологических, ожоговых больных, при лучевой болезни и т. При появлении роста на одной, двух или трех средах следует соотносить результаты посева с клиническими данными и с результатами предыдущих и последующих бактериологических исследований. Наличие в других материалах от того же больного идентичных штаммов микроорганизмов свидетельствует о том, что выделение этих микробов в посеве крови не случайно. При отсутствии роста в аэробных условиях и наличии грамотрицательных палочек в осадке при посеве на среду Тароцци следует повторно сеять кровь в анаэробных условиях с целью выделения анаэробов, особенно неспорообразующих видов бактероидов, клостридий и др. Рекомендуется производить повторные посевы крови, которые позволяют не только подтвердить бактериологический диагноз, но и проводить контроль эффективности лечения. Спинномозговую жидкость исследуют во всех случаях предполагаемого менингита как первичного процесса, так и осложнения после черепно-мозговой травмы, нейрохирургической операции или наличия инфекционного очага в организме. Наиболее частыми возбудителями менингита у новорожденных являются: Escherichia coli, Klebsiella pneumoniae, Proteus mirabilis, Serratia marcescens, Enterobacter, Pseudomonas aeruginosa, Streptococcus гр. B, D , Listeria monocitogenes. У детей раннего возраста: Neisseria meningitidis, Streptococcus pneumoniae, Haemophilus influenzae, Mycobacterium tuberculosis. У лиц пожилого возраста и ослабленного контингента больных возникновение менингита может быть как результатом заражения N. Этиологическим фактором менингитов, развившихся после черепно-мозговой травмы или как осложнение после нейрохирургических операций, чаще всего являются Staphylococcus aureus, Staphylococcus epidermidis, S. Для бактериологического анализа обычно используют спинномозговую жидкость, взятую при люмбальной пункции или при пункции боковых желудочков мозга. Взятие спинномозговой жидкости проводят как можно раньше, желательно до начала антибактериального лечения. Взятие спинномозговой жидкости производит врач. Проба отбирается со строгим соблюдением правил асептики. Свежевзятый ликвор из шприца без иглы над спиртовкой вносят в стерильную, желательно центрифужную пробирку в количестве 1 - 2 мл. Ликвор для исследования немедленно доставляют в лабораторию, где тотчас, пока спинномозговая жидкость теплая, ее подвергают анализу, так как некоторые микроорганизмы, например, N. Спинномозговую жидкость центрифугируют 5 минут при об. Если присланная жидкость мутная, мазки готовят без центрифугирования. При исследовании ликвора с неопределенным возбудителем или на менингококк мазки после высушивания фиксируют на пламени и окрашивают метиленовым синим или по Граму в модификации Калины. После полного растворения навески йодистого калия в спирте раствор соединяют с раствором фуксина и йода. Полученную смесь хранят во флаконе из темного стекла с притертой или резиновой пробкой. На обезжиренное стекло наносят каплю воды. В ней суспендируют культуру и туда же вносят петлей каплю раствора бриллиантовой зелени. После высыхания препарат фиксируют над пламенем. Затем на препарат наливают основной реактив на 1,5 - 2 минуты, после чего краску сливают и стекло в наклонном положении промывают водой. Далее препарат в наклонном положении промывают в спирте до отхождения облачков краски и немедленно отмывают водой. Затем производят докрашивание препарата водным раствором фуксина в течение 2 минут, окончательную промывку водой и подсушивание. При микроскопировании грамотрицательные бактерии выглядят ярко-розовыми, грамположительные - зеленовато-черными или темно-фиолетовыми. Желательно для контроля на каждом стекле делать мазок культур стафилококков или кишечной палочки. Для обнаружения микобактерий туберкулеза мазки готовят из фибринозной пленки или осадка после центрифугирования. Препарат из фибринозной пленки следует готовить тонким, осторожно растягивая ее слегка подогретой бактериологической петлей или растирая между двумя предметными стеклами. Мазки красят по Цилю-Нильсену. Результаты микроскопии окрашенного мазка спинномозговой жидкости в ряде случаев позволяют установить наличие туберкулезных бацилл, менингококков или условно-патогенных бактерий, вызвавших гнойный менингит. В соответствии с этими результатами вносят коррективы в ход бактериологического исследования. Результаты микробиологического исследования сообщаются лечащему врачу как предварительные данные. Окончательный ответ при бактериоскопическом исследовании выдается только при обнаружении Mycobacterium tuberculosis. Так как гнойные менингиты имеют различную этиологию, то при исследовании спинномозговой жидкости с неопределенным возбудителем необходимо производить посев ликвора на несколько питательных сред с целью выделения более широкого спектра возбудителей. Полужидкий агар для обогащения ликвора, приготовленного на бульоне из перевара Хоттингера или рыбного гидролизата. На второй день просматривают сделанные накануне посевы спинномозговой жидкости. При появлении роста на плотных питательных средах изучают характер роста, морфологию выросших бактерий при окраске по Граму. У бактерий, выросших на плотных питательных средах, определяют чувствительность к антибиотикам, а также проводят отсевы на элективные среды для получения чистой культуры с последующей их идентификацией. При отсутствии роста колоний на твердых средах делают высев из среды накопления на чашку с сывороточным агаром и кровяную чашку. Твердые среды с посевами ликвора при отсутствии роста на протяжении 24 часов надо инкубировать в течение 3 - 6 дней. При отрицательных результатах высевы повторяют через 8 - 10 дней. Спинномозговая жидкость является стерильной средой, поэтому выделение любого микроорганизма должно расцениваться как положительный результат. Редко нахождение условно-патогенных микроорганизмов и сапрофитов, которые ранее никогда не выявлялись, может вызвать сомнение и расцениваться как загрязнение или в момент взятия пробы, или при повторных высевах со среды обогащения. В таких случаях большое значение имеют клинические данные. При вторичных менингитах, обусловленных инфекцией гнойновоспалительных процессов различной локализации абсцесс, флегмона, отит, синусит, язвы от пролежней, фурункулы необходимо провести микробиологическое исследование этого очага, потому что возможна вероятность обнаружения идентичных микроорганизмов и в спинномозговой жидкости. У детей параллельно с исследованием спинномозговой жидкости необходимо проводить исследование гемокультур, так как менингиты часто связаны с бактериемией, и она предшествует появлению микроорганизмов в спинномозговой жидкости. При хронических процессах с временным улучшением желательно провести микробиологические исследования ликвора после окончания антибактериального лечения. Желчь исследуют при воспалительных заболеваниях желчного пузыря и желчных протоков холециститы, холангиты, желчно-каменная болезнь. В отдельных случаях встречается смешанная аэробная и анаэробная инфекция. Желчь собирают при зондировании в процедурном кабинете отдельно по порциям A, B и C в три стерильные пробирки, либо во время операции с помощью шприца в одну пробирку, соблюдая правила асептики. Полученные порции желчи доставляют в лабораторию не позднее 1 - 2 часов от момента взятия, следя за тем, чтобы пробирки находились в строго вертикальном положении. По 0,1 мл каждой порции желчи высевают на чашку с кровяным агаром; по 0,5 мл - на чашку со средой Эндо; в соотношении 1: Учитывают результаты первичных посевов. В случае бактериального роста на кровяном агаре подсчитывают количество колоний каждого вида, пересчитывают на 1 мл исследуемого материала и после бактериоскопии окрашенных по Граму мазков проводят дальнейшую идентификацию культур и определяют чувствительность к антибиотикам. При подозрении на рост анаэробных культур посевы инкубируют в анаэростате, заполненном инертным газом. В случае выделения анаэробов проводят их дальнейшее изучение. При отсутствии роста на среде Тароцци наблюдение ведут 5 дней. С целью выделения сальмонелл в последующие 3 дня делают высевы на элективные среды висмут - сульфитный агар как со среды накопления, так и из нативной желчи, которая в течение трех дней выдерживается в термостате. Наиболее достоверным является исследование желчи, полученной во время операции. При дуоденальном зондировании возможна контаминация желчи микрофлорой ротовой полости и верхних отделов пищеварительного тракта. Так, стафилококки и стрептококки находят в дуоденальном содержимом значительно чаще, чем в желчном пузыре при оперативном вмешательстве. Поэтому следует с особой осторожностью подходить к определению этиологической роли указанных микроорганизмов при холециститах и холангитах. Необходимо проводить количественное определение каждого вида бактерий в 1 мл желчи, так как по степени микробного обсеменения можно судить о локализации воспалительного процесса и более объективно оценивать его динамику при повторных исследованиях. Выделение золотистого стафилококка в значительном количестве может свидетельствовать о наличии печеночного или диафрагмального абсцесса. Обнаружение в дуоденальном содержимом сапрофитных нейссерий и дрожжеподобных грибов свидетельствует о контаминации желчи микрофлорой ротовой полости. Исследование мочи направлено на выделение возбудителя заболевания и на количественное определение степени бактериурии. Моча здорового человека стерильна. Однако при прохождении через мочеиспускательный канал она может загрязняться вегетирующей в нем микрофлорой. В дистальном отделе уретры в норме обнаруживают следующие микроорганизмы: Staphylococcus epidermis, Streptococcus faecalis, микроорганизмы семейства и родов: Corynebacterium, Lactobacillus, Enterobacteriaceae, Bacteroides и некоторые другие виды. Возбудителями воспалительных процессов в мочевой системе наиболее часто являются условно-патогенные бактерии Escherichia coli, S. Представители рода Salmonella и семейства Mycobacteriaceae также могут быть выделены из мочи при заболеваниях мочевой системы. Исследованию подлежит средняя порция свободно выпущенной мочи, взятой в количестве 3 - 5 мл в стерильную посуду после тщательного туалета наружных половых органов. Катетеризация мочевого пузыря для рутинного исследования не применяется, так как она может привести к инфицированию мочевых путей. К катетеризации мочевого пузыря прибегают в некоторых случаях для уточнения локализации инфекции - в мочевом пузыре или в почках. С этой целью мочевой пузырь опорожняют катетером и промывают раствором антибиотика, после чего с интервалом в 10 минут берут пробы мочи для исследования. Если инфекция локализуется в почках, микроорганизмы содержатся во всех порциях мочи. При инфекции мочевого пузыря моча остается стерильной. В отдельных случаях делают надлобковую пункцию мочевого пузыря, при которой получают наиболее достоверные результаты. Материал для исследования следует брать до начала антибактериальной терапии или в интервалах между курсами лечения. Содержащиеся в моче микробы быстро размножаются при комнатной температуре, что может дать ложные результаты при определении степени бактериурии. В связи с этим, от момента взятия пробы мочи до начала ее исследования в лаборатории должно проходить не более 1 - 2 часов при хранении при комнатной температуре и не более суток - при хранении в холодильнике. Выделение микроорганизмов из мочи качественное исследование не позволяет отдифференцировать бактериурию, возникающую в результате загрязнения мочи нормальной микрофлорой дистального отдела уретры, от бактериурии, развивающейся при инфекционных процессах в мочевыводящей системе, возбудителями которых являются условно-патогенные микроорганизмы. С этой целью применяют количественные методы исследования, основанные на определении числа микробных клеток в 1 мл мочи степень бактериурии. Платиновой петлей, диаметром 2 мм, емкостью 0, мл, производят посев мочи 30 - 40 штрихов на сектор A чашки Петри с простым питательным агаром. После этого петлю прожигают и производят 4 штриховых посева из сектора A в сектор I и аналогичным образом - из сектора I во II и из II в III. Определение степени бактериурии по количеству выделенных колоний производят согласно таблице 1. Метод секторных посевов позволяет не только определить степень бактериурии, но и выделить возбудителя заболевания в чистой культуре. Подсчитывают количество колоний, выросших на плотных питательных средах и пересчитывают обсемененность на 1 мл мочи. Колонии, выросшие на плотных питательных средах, отсевают в пробирки со скошенным агаром, выделенную чистую культуру идентифицируют и определяют ее чувствительность к антибактериальным препаратам. Ускоренные методы основаны на определении продуктов метаболизма, образующихся при размножении микроорганизмов в моче. Они дают менее точные результаты, чем метод секторных посевов, и чаще используются при массовых профилактических обследованиях больших контингентов людей, для экспресс-диагностики. При положительном результате, полученном ускоренными методами, необходимы дальнейшие исследования с помощью более точного метода секторных посевов. При использовании ускоренных методов лаборатория дает предварительный ответ через день после получения результатов определения степени бактериурии и окончательный - через 4 дня: Нитриты, являющиеся продуктами метаболизма представителей семейства Enterbacteriaceae, могут быть обнаружены в моче с помощью реактива Грисса. Трифенилтетразолий хлористый ТТХ под действием продуктов жизнедеятельности микроорганизмов переходит из бесцветного в красный нерастворимый в воде трифенилформазан. Интенсивность окраски находится в прямой зависимости от степени бактериурии. Насыщенный раствор двузамещенного фосфорнокислого натрия. Рабочий раствор - 4 мл раствора 1 смешивают со мл раствора 2. Хранят растворы в прохладном защищенном от света месте. Срок хранения растворов 1 и 2 - до 2-х месяцев, рабочего раствора - не более 2-х недель. Основной задачей при интерпретации полученных данных является доказательство этиологической роли условно-патогенных микроорганизмов. Степень бактериурии позволяет дифференцировать инфекционный процесс в мочевых путях от контаминации мочи нормальной микрофлорой. С этой целью используют следующие критерии:. Изменение степени бактериурии в процессе заболевания может быть использовано для контроля за течением процесса и эффективностью терапии: Следует иметь в виду, что в некоторых случаях - у больных, получающих антибактериальную терапию, при плохом оттоке мочи, при низком ее удельном весе и pH ниже 5 - может наблюдаться низкая степень бактериурии при имеющемся заболевании. Поэтому, помимо степени бактериурии, следует изучать вид выделенных из мочи микроорганизмов. Эшерихии, протей, синегнойная палочка, клебсиеллы чаще выделяются из мочи больных уроинфекцией. Дифтероиды, лактобациллы, грамположительные палочки обычно выделяются из мочи здоровых людей. При трактовке результатов исследования следует учитывать повторность выделения одного и того же вида микроорганизмов: Учитывается также присутствие в моче монокультуры или ассоциации микроорганизмов. Монокультура чаще выделяется при острых воспалительных процессах и коррелирует с высокой степенью бактериурии. Ассоциации микроорганизмов чаще встречаются при хронических процессах и коррелируют с низкой степенью бактериурии. При окончательной трактовке результатов микробиологического исследования необходимо учитывать данные клиники и другие лабораторные анализы. В окончательном ответе, который выдается лабораторией, указывается степень бактериурии, вид выделенных культур и их чувствительность к лекарственным препаратам. Возбудителями гнойно-воспалительных процессов дыхательных путей чаще всего являются условно-патогенные микроорганизмы следующих родов и видов: Streptococcus pneumoniae, Streptococcus pyogenes, Staphylococcus aureus, Haemophilus influenzae, Pseudomonas aeruginosa, Neisseria, Corynebacterium, Klebsiella, Citrobacter, Proteus, Candida, Actinomyces и др. При направленном исследовании могут быть выделены Mycobacterium tuberculosis и другие микобактерии, Mycoplasma, Bacteroides. Особенностью микробиологического исследования при инфекциях дыхательных путей является почти обязательное наличие в исследуемом материале нескольких видов микроорганизмов. В отделяемом зева, трахеи, бронхов, носа в норме обнаруживаются следующие микроорганизмы: Staphylococcus epidermidis, Streptococcus viridans, Neisseria, Corynebacterium, Lactobacillus, Candida и некоторые другие. При носительстве могут быть обнаружены S. Мокрота, проходя через верхние дыхательные пути и полость рта, может контаминироваться вегетирующей в них микрофлорой. Материалом для изучения этиологии заболеваний дыхательных путей служат: Материал собирают с соблюдением правил асептики в предварительно простерилизованные баночки или пробирки и доставляют в лабораторию. Хранение материала способствует размножению сапрофитирующей микрофлоры, развитию процессов гниения и брожения, что искажает результаты анализа. Интервал между взятием материала и его посевом не должен превышать 1 - 2 часа. Утреннюю мокроту, выделяющуюся во время приступа кашля, собирают в стерильную банку. Перед откашливанием больной чистит зубы и полощет рот кипяченой водой с целью механического удаления остатков пищи, слущенного эпителия и микрофлоры ротовой полости. При отсутствии или скудном количестве мокроты производят смыв из бронхов физиологическим раствором, однако, при этом микробиологическая ценность исследования снижается из-за разведения секрета часто значительного и бактерицидного действия раствора на чувствительные микроорганизмы, поэтому нередко концентрация бактерий в бронхиальном содержимом в 10 - раз ниже, чем в мокроте. Кроме того, трудоемкость эндоскопического взятия материала и тяжесть манипуляции для больного ограничивает проведение повторных исследований в динамике заболевания. При бронхоскопии рекомендуется вводить не более 5 мл физиологического раствора с последующим его отсасыванием в стерильную пробирку. Пунктат инфильтрата или абсцесса легкого. Исследование пунктата наиболее эффективно до прорыва инфильтрата или абсцесса в дренирующий бронх. При трансторакальной пункции получают материал непосредственно из очага поражения и избегают его обсеменения посторонней микрофлорой. Глотка, ротовая полость и нос. Материал из ротовой полости берут натощак или через 2 часа после еды стерильным ватным тампоном или ложечкой со слизистой оболочки или ее пораженных участков у выходов протоков слюнных желез, поверхности языка, из язвочек. При наличии пленки последнюю снимают стерильным пинцетом. Материал из носовой полости забирают сухим стерильным ватным тампоном, который вводят в глубь полости носа. Материал из носоглотки берут стерильным заднеглоточным ватным тампоном. Тампон осторожно вводят через носовое отверстие в носоглотку. Если при этом начинается кашель, тампон не удаляют до его окончания. Для проведения анализов на дифтерию исследуют одновременно пленки и слизь из носа и глотки. Материал из носа и глотки берут разными тампонами. При подозрении на клебсиеллы, независимо от места локализации процесса, исследуют материал из носоглотки и обеих половин носовой полости. Из мокроты или материала, взятого стерильным ватным тампоном, одновременно с посевом приготавливают мазки, окрашивают их по Граму и микроскопируют с иммерсионным объективом. При обнаружении микроорганизмов отмечают их морфологические и тинкториальные свойства кокки, палочки, отношение к окраске по Граму. Микроскопическое исследование является важным ориентиром. При просмотре мазков из мокроты оценивают общую картину микрофлоры: При исследовании мокроты обращают внимание на наличие гранулоцитов, которые всегда можно обнаружить при воспалительных процессах в нижних отделах дыхательного тракта. Их отсутствие и большое количество эпителиальных клеток в мокроте свидетельствует о том, что материал взят неправильно с примесью слюны и требуется его повторное взятие. При острой инфекции в мокроте, как правило, обнаруживают не более 1 - 2 типов бактерий, локализованных вблизи гранулоцитов. Микроорганизмы, попавшие из ротовой полости, чаще располагаются около эпителиальных клеток, и ими следует пренебречь. По результатам микроскопии могут быть внесены изменения в ход микробиологического исследования. К среде добавляют дефибринированную кровь лошади, барана, кролика, 5 мл. Мокроту выливают в чашку Петри. С помощью стерильных металлических толстых игл с утолщенными концами типа зубного зонда выбирают 2 - 3 гнойных комочка мокроты. С целью очистки комочков мокроты от наслоившихся обитателей верхних дыхательных путей и ротовой полости их трехкратно отмывают в стерильном физиологическом растворе, после чего засевают на питательные среды. В чашки Петри посев производят стеклянным стерильным шпателем, равномерно растирая материал по поверхности питательной среды. Содержимое бронхов, полученное при бронхоскопии или при отсасывании через трахеостому, засевают как мокроту, но без предварительного отмывания гнойных комочков физиологическим раствором. При отсутствии комочков гноя и слизи производят посев материала, набирая его пастеровской пипеткой. Материал из глотки, носа и ротовой полости засевают так же, как мокроту. Посев производят на среды, хранившиеся при комнатной температуре или согретые в термостате. При посеве тампоном материал втирают в среду со всей поверхности тампона на небольшом участке в 1 - 2 кв. Учитывают количество выросших колоний, соотношение отдельных ассоциантов, описывают характер колоний. Выделяют чистые культуры микроорганизмов, проводят их идентификацию и определяют чувствительность к антибактериальным препаратам. Мазки из гортани и зева. При количественном исследовании тампоны тщательно суспендируют в 1 мл бульона и условно принимают за разведение 1: Дальнейшее исследование этих материалов проводят как количественное определение мокроты. При воспалительных процессах дыхательных путей, когда высеваются условно-патогенные микроорганизмы, интерпретация полученных результатов представляет определенные трудности. Следует учитывать, что наличие или отсутствие в исследуемом материале микроорганизмов не может иметь решающего значения для диагноза. Особое значение принадлежит количественной оценке роста различных видов микроорганизмов, выросших при первичном посеве на плотных питательных средах. Для ориентировочной оценки количественного роста микроорганизмов в ассоциации целесообразно пользоваться следующими критериями:. III и IV степени роста обычно свидетельствуют об этиологической роли данного микроорганизма, I и II степени - о носительстве или контаминации. О возбудителе необходимо судить на основании комплекса исследований: Количественный метод обеспечивает выделение чистых культур микроорганизмов и дает возможность судить более точно об этиологической значимости выделенных микроорганизмов. Следует подчеркнуть достаточную информативность и высокую корреляцию качественного и количественного методов посева при правильном их выполнении. При появлении гнойно-воспалительного процесса в ране раневое отделяемое, гной, кусочки инфицированных тканей грануляции, мышцы и т. Возбудителями гнойно-воспалительных процессов могут быть представители различных родов, подавляющее большинство которых относят к так называемой "условно-патогенной" микрофлоре аэробной, микроаэрофильной и анаэробной. Среди них чаще встречаются виды родов: Staphylococcus, Streptococcus, Pseudomonas, Escherichia, Proteus, Citrobacter, Klebsiella, Enterobacter, Hafnia, Serratia, Aeromonas, Alcaligenes, Acetobacter, Haemophilus, Peptococcus, Bacillus, Clostridium, Corynebacterium, Propionibacterium, Bacteroides, Nocardia, Listeria, Fusobacterium, Neisseria, Mycrococcus, Mycoplasma. Реже - Yersinia, Ervinia, Salmonella, Acinetobacter, Moraxella, Brucella, Candida, Actinomyces. Микроорганизмы могут вызывать и поддерживать гнойный процесс как в монокультуре, так и в ассоциации. Взятие материала производит лечащий врач при соблюдении правил асептики. При взятии материала из раны стерильным ватным тампоном кожу вокруг раны предварительно обрабатывают спиртом или другим антисептиком, некротические массы, детрит и гной удаляют стерильной салфеткой. Взятие материала стерильным тампоном производят круговыми вращательными движениями от центра к периферии поверхности раны. Материал берут двумя тампонами, один из которых используют для микроскопии, а другой - для посева. При наличии в ране дренажей для активной аспирации отделяемого последнее отсасывают шприцем и в количестве 1 - 2 мл помещают в стерильную пробирку. Кусочки тканей, гной, промывную жидкость из дренажа также берут в стерильные пробирки при соблюдении всех правил асептики. Не более чем через 1 час после взятия весь материал доставляют в микробиологическую лабораторию для немедленного посева. При невозможности доставить материал в течение этого времени, он должен храниться в холодильнике, но не более двух часов. Материал, взятый одним из стерильных ватных тампонов, "размазывают" по стерильному предметному стеклу, окрашивают по Граму и просматривают под микроскопом. При обнаружении микроорганизмов отмечают их морфологическую характеристику грамположительные и грамотрицательные палочки, кокки и др. В соответствии с результатами микроскопии могут быть внесены коррективы в ход бактериологического исследования. Посев на чашку с агаром производят методом "тампон-петля": После этого материал рассевают по чашке при помощи петли штрихами, перпендикулярными к "дорожкам". Такой посев позволяет выделить микроорганизмы в виде отдельных колониеобразующих единиц даже из ассоциации микроорганизмов. При обнаружении роста производят отсев отдельных колоний на элективные среды с целью их идентификации. Отмечают, растут ли микроорганизмы в виде монокультуры или в ассоциации. При обнаружении ассоциации на плотной питательной среде отмечают преимущественный рост какого-либо представителя ассоциации если это наблюдается. При отсутствии роста в первые сутки посевы оставляют в термостате, ежедневно просматривают и при визуальном обнаружении роста также производят соответствующие отсевы. Ответ об отсутствии роста выдают через 5 суток термостатирования. В ответе лаборатории указывают, какие виды микроорганизмов выделены, в каком количестве слабый, умеренный или обильный рост на плотной питательной среде. При выделении ассоциации микроорганизмов в ответе перечисляют все виды микроорганизмов, входящие в ассоциацию, и отмечают, имеется ли преимущественный рост какого-либо из представителей ассоциации. Микробиологическое исследование проводится при заболеваниях конъюнктивы, век, слезных мешков, роговицы. Следует учитывать, что в норме только с конъюнктивы и в небольшом количестве регулярно выделяются Staphylococcus epidermidis, Corynebacterium xerosis, Corynebacterium pseudodiphteriticum, непатогенные микроорганизмы семейства Neisseriaceae, Sarcina. У отдельных лиц временно могут выделяться Staphylococcus aureus, микроорганизмы семейства Streptococcaceae S. Другими возбудителями острых гнойных и хронических конъюнктивитов являются Neisseria gonorrhoeae, Moraxella lacunata, Branhamella catarrhalis, Corynebacterium diphteriae, Streptococcus pyogenes, Streptococcus viridans, Streptococcus faecalis, Haemophilus aegypticus, Haemophilus influenzae, Pseudomonas aeruginosa, микроорганизмы семейств Enterobacteriaceae, родов Proteus, Klebsiella, Escherichia. Реже встречаются Listeria monocytogenes, грибы рода Candida, Aspergillus. Помимо вышеперечисленных микроорганизмов, являющихся возможными возбудителями воспалительных процессов не только глаз, но и других систем и органов человека, известны микроорганизмы, обуславливающие только конъюнктивиты. К ним относятся Haemophilus aegypticus, Moraxella lacunata, Branchamella catarrhalis. Материал забирают с пораженных мест в разгар воспалительного процесса с соблюдением правил асептики. Не менее чем за 5 - 6 часов до исследования отменяют все медикаменты и процедуры. Взятие материала производит врач-окулист. Отделяемое берут с конъюнктивы платиновой петлей, предварительно прожженной в пламени спиртовки и остуженной, или стеклянными стерильными палочками. При наличии достаточно обильного гнойного отделяемого используют стерильные ватные тампоны, которыми берут гной с внутренней поверхности нижнего века движением к внутреннему углу глазной щели. Необходимо следить, чтобы при моргании ресницы не касались тампона придерживать веки руками. Корочки гноя удаляют пинцетом. Берут материал из язвочки у основания ресниц. Материал на исследование, после обезболивания, можно взять платиновой петлей или другим подходящим инструментом. Если больной применяет контактные линзы, необходимо исследовать их внутреннюю поверхность. Взятый влажным тампоном материал наносят на поверхность предметного стекла, обезжиренного и прокаленного над пламенем горелки. Мазки высушивают, стекло маркируют, на его обратной стороне обводят границы мазка. В кабинете врача производят посев на сывороточный бульон и тиогликолевый бульон. Мазок и посевы затем доставляются в лабораторию для исследования. Присланные в лабораторию мазки фиксируют на пламени и окрашивают по методу Грама или метиленовым синим. Микроскопия окрашенных мазков позволяет предположить наличие тех или иных видов бактерий, вызвавших заболевание глаз. Для обнаружения Mycobacterium tuberculosis окраску проводят по методу Циль-Нильсона. Бактериоскопию нативного материала проводят при подозрении на кандидоз методом "раздавленной капли" см. Результаты бактериоскопии могут быть сообщены врачу в виде предварительного ответа. Дальнейший ход микробиологического исследования в ряде случаев определяется видом предполагаемых возбудителей. На второй день при появлении роста в бульоне изучают характер роста и проводят бактериологическое исследование с окраской по Граму. В зависимости от морфологии микроорганизмов делаются высевы на элективные питательные среды для выделения чистых культур с последующей идентификацией и определением чувствительности. Проводят качественную и количественную оценку бактериального роста единичные колонии, умеренный, обильный рост. Производят отсев отдельных колоний на элективные среды с целью их идентификации и определения чувствительности. При отсутствии роста в первые сутки посевы оставляют в термостате, ежедневно просматривают их. При обнаружении роста производят соответствующие отсевы. Окончательный ответ об отсутствии роста выдают через трое суток. При интерпретации результатов микробиологического исследования глаз необходимо учитывать контингент обследованных больных, анамнез, клинические проявления болезни. Необходимо учитывать, что гонококки являются одной из частых причин острых гнойных конъюнктивитов у взрослых и особенно у детей. Кератоконъюнктивитам, вызванным нормальной микрофлорой конъюнктивы, носоглотки, ротовой полости, часто предшествует вирусная инфекция верхних дыхательных путей, аллергические риниты, травмы, оперативные вмешательства, а также использование промывных растворов, инфицированных госпитальными штаммами. Конъюнктивит наружных углов глаза Кох-Уикса часто вызывается микроорганизмами рода Moraxella lacunata. Слабая воспалительная реакция может быть вызвана и непатогенными микроорганизмами рода Corynebacterium, но в таких случаях наблюдается более обильный рост микроорганизмов, чем при исследовании нормальной конъюнктивы. Длительное местное применение антибиотиков приводит к выделению грибов рода Candida и Aspergillus. При воспалительных заболеваниях наружного, среднего и внутреннего уха исследуют гнойное или серозное отделяемое. При этом следует учитывать, что в норме в наружном ухе, слуховом проходе присутствует нормальная микрофлора, представленная сапрофитными и условно-патогенными бактериями - обитателями кожи. Это Staphylicoccus epidermidis, Corynebacterium pseudodiphtheriticum. В среднем и внутреннем ухе микрофлора отсутствует. При остром воспалительном процессе возбудителем может быть Staphylococcus aureus, S. При хронически протекающей инфекции чаще обнаруживают ассоциации грамотрицательных микроорганизмов рода Proteus, Klebsiella, Enterobacter, Escherichia, Pseudomonas, а также Mycobacterium tuberculosis, Actinomyces и плесневые грибы Aspergillus, Penicillium, Mucor. При поражениях среднего и внутреннего уха исследуют пунктаты и материал, полученный во время оперативных вмешательств, собранный в стерильную посуду. Проводят с целью обнаружения друз и элементов гриба при подозрении на микоз методом "раздавленной капли". Исследуемый материал помещают на предметное стекло в каплю физиологического раствора и покровным стеклом осторожно накрывают так, чтобы жидкость была без пузырьков воздуха. Правильно сделанная капля заполняет все пространство между покровным и предметным стеклом, но при этом жидкость не выступает за края покровного стекла. Микроскопию проводят при опущенном конденсоре сначала при малом увеличении объектив х8 , затем при большом объектив х Бактериоскопия нативного окрашенного материала. Во всех случаях исследования окрашивание мазков проводят по Граму. При подозрении на туберкулез - окрашивают методом Циль-Нильсена, на актиномикоз - по Романовскому-Гимзе. При положительных находках может быть дан ориентировочный ответ. Дальнейший ход микробиологического исследования определяется видом предполагаемого возбудителя. Так как хронические гнойные отиты вызываются различными микроорганизмами, в первый день исследования необходимо производить посев на несколько питательных сред. При появлении роста на плотных питательных средах изучают выросшие колонии, проводят качественную и количественную оценку бактериального роста единичные колонии, умеренный, обильный рост , выделяют чистую культуру предполагаемого возбудителя. Проводят дальнейшее изучение с целью идентификации и определения чувствительности к антибиотикам. При выявлении специфических возбудителей интерпретация результатов не вызывает трудностей. В других случаях, когда процесс вызывается условно-патогенными бактериями, необходимо применение количественных критериев оценки. Преобладающий в мазке нативного материала, окрашенного по Граму, вид микроба, массивность роста однотипных колоний, повторность выделения культур дают возможность сделать заключение о возможном возбудителе процесса. Необходимо иметь в виду, что в процессе лечения антибактериальными средствами нередко происходит замена бактериальной флоры на грибковую. Вызвать гнойно-воспалительные заболевания полового тракта могут как истинно-патогенные микроорганизмы Neisseria gonorrhoeae, Micobacterium tuberculosis, Treponema pallida, Listeria monocytogenes , так и микроорганизмы условно-патогенной группы, роль которых в последние годы заметно возросла. Наиболее часто из патологического материала выделяют условно-патогенные микроорганизмы родов: Escherichia, Klebsiella, Proteus и других представителей семейства Enterobacteriaceae, а также родов Pseudomonas, Mycoplasma, Streptococcus гр. D, B , Staphylococcus, Candida и другие. Микробиологическое обследование женской половой сферы представляет определенные трудности, так как нижние отделы полового тракта в норме содержат разнообразную микрофлору, меняющуюся в различные возрастные периоды жизни женщины. Влагалище новорожденных заселяют молочнокислые бактерии, но постепенно они вытесняются кокковой группой преобладает Staphylococcus epidermidis , которая остается характерной до наступления полового созревания. В репродуктивном возрасте в составе микрофлоры преобладают аэробные молочнокислые бактерии доминирует группа Bact. Dederleini в ассоциации с другими сапрофитами. Встречаются следующие виды и роды: Lactobacterium, Peptococcus, Peptostreptococcus, Corynebacterium, Staphylococcus epidermidis и др. В процессе родов количество микроорганизмов во влагалище резко уменьшается, происходит самоочищение родовых путей. В первые 2 - 3 дня послеродового периода значительно нарастает число бактерий условно-патогенной группы условия для жизнедеятельности молочнокислых бактерий отсутствуют. В лохиях обнаруживают в большом количестве эпидермальный стафилококк, эшерихии и другие энтеробактерии, микоплазмы, бактероиды, аэробные и анаэробные стрептококки. Постоянно, но не в большом количестве, эти микроорганизмы обнаруживаются и в полости матки. Однако, при гладком течении послеродового периода быстро наступает самоочищение полости матки. Содержимое цервикального канала в норме стерильно. Лишь у наружного зева в слизисто-гнойной пробке в небольшом количестве могут быть обнаружены микроорганизмы преимущественно молочнокислые бактерии как результат обсеменения микрофлорой верхней трети влагалища. Взятие материала для микробиологического исследования проводит врач акушер-гинеколог при подозрении на инфекционную природу патологического процесса. Отделяемое берут стерильным ватным тампоном. При воспалении Бартолиниевых желез производят их пункцию, при вскрытии абсцесса железы гной берут стерильным ватным тампоном. После введения зеркала и подъемника материал для исследования берут стерильным ватным тампоном из заднего свода или с патологически измененных участков слизистой. Материал для посева должен быть взят до проведения мануального исследования. После обнажения шейки матки в зеркалах влагалищную часть ее тщательно обрабатывают ватным тампоном, смоченным стерильным физиологическим раствором или стерильной водой. После этого тонким ватным тампоном, осторожно введенным в цервикальный канал, не касаясь стенок влагалища, берут материал для исследования. Кроме того, для посева может быть использован соскоб слизистой, полученный при диагностическом выскабливании стенок цервикального канала. Правильное взятие материала из матки может быть выполнено только при использовании специальных инструментов типа шприца-аспиратора, имеющего на зонде покрытие. После прохождения зондом цервикального канала в полости матки раскрывают наружную оболочку зонда и набирают в шприц содержимое матки. После этого закрывают наружную оболочку и зонд выводят из матки. При воспалительном процессе в придатках матки получение материала из очага инфекции гной, экссудат, кусочки органов становится возможным только при оперативном вмешательстве или при проведении диагностической пункции опухолевидных образований в малом тазу, проводимой через влагалищные своды. В некоторых случаях острого воспалительного процесса, если очаг инфекции в придатках матки сообщается с полостью матки, полезными могут оказаться повторные исследования отделяемого цервикального канала. При подозрении на анаэробную инфекцию посев должен быть выполнен сразу же после взятия материала путем помещения тампона в пробирку с тиогликолевым полужидким агаром. Параллельно с взятием материала на посев врач акушер-гинеколог готовит мазки для микроскопии в количестве не менее двух , используя для этого отдельные стерильные тампоны или стерильные гинекологические инструменты. При приготовлении мазков надо равномерно распределить материал на предметном стекле мягкими движениями, не применяя грубого втирания и резких штриховых движений инструментом. Мазок высушивают при комнатной температуре, покрывают чистым предметным стеклом или помещают в чашку Петри и отправляют в лабораторию. Хранение влажного мазка, сдавленного между двумя стеклами, не допустимо. Рекомендуемая техника выполнения мазка позволяет клеткам распределиться слоями, не повреждая их, сохраняет истинное распределение и количественное соотношение компонентов исследуемого материала, дает возможность наблюдать внутриклеточное расположение бактерий гонококки. Взятый для исследования материал должен быть сразу же отправлен в микробиологическую лабораторию для немедленного посева. При невозможности выполнить это требование взятый материал должен храниться в холодильнике, но не более двух часов. В лаборатории доставленные мазки исследуемого материала окрашивают по Граму и микроскопируют с иммерсионным объективом. Отмечают проявления воспалительной реакции: В частности, при обнаружении грамотрицательных диплококков, особенно при внутриклеточном их расположении, следует обратить внимание лечащего врача на необходимость дополнительного обследования больной на гонорею. Выявление в мазках простейших трихомонады , мицелия или бластоспор гриба может служить основанием для выдачи ответа лечащему врачу об обнаружении этих микроорганизмов в исследуемом материале. Исследуемый материал, взятый тампоном, засевают этим тампоном, используя штриховую технику посева, на половину чашки Петри с кровяным агаром, затем производят посев тампоном в сахарный бульон. Доставленные в лабораторию жидкие пробы гной, экссудат, содержимое тубоовариальных образований, околоплодные воды засевают по 0,1 мл на плотные питательные среды, растирая материал по поверхности среды шпателем. Используют кровяной агар, среду Эндо. Кроме того, посев производят в сахарный бульон. Кусочки тканей размельчают, соблюдая стерильность, в микроразмельчителе тканей или растирают в ступке с песком, добавляя питательный бульон или физиологический раствор. Полученную взвесь засевают на несколько чашек с плотными питательными средами, а также в сахарный бульон. При появлении роста на плотных средах проводят подсчет колоний различной морфологии, учитывая их соотношение. При помутнении бульона делают мазки на стекле окраска по Граму и в соответствии с результатами микроскопии производят высевы на плотные питательные среды кровяной агар, желточно-солевой агар, среду Эндо. Затем проводят видовую идентификацию микроорганизмов и определение их чувствительности к антибактериальным препаратам. Отрицательный результат исследования выдается при отсутствии роста на всех питательных средах в течение 72 часов. Интерпретация результатов микробиологического исследования материалов, полученных при обследовании половых органов женщин, представляет определенные трудности, так как чаще всего регистрируют рост нескольких видов условно-патогенных микроорганизмов. В каждом конкретном случае следует учитывать совокупность признаков: Так, при исследовании материала из закрытых полостей пунктаты опухолевидных образований в малом тазу, околоплодные воды , а также органов, в норме стерильных содержимое полости матки, кусочки органов, тканей, удаляемых при полостных операциях , рост микроорганизмов, особенно монокультуры в сочетании с находками микроорганизмов сходной морфологии в первичных мазках, с определенностью свидетельствуют об их этиологической роли в воспалительном процессе. При исследовании материала из мест, в норме имеющих разнообразную микрофлору, основное значение принадлежит количественной оценке различных видов бактерий, выросших при первичном посеве на плотные питательные среды. Кроме того, следует учитывать клинические данные, а также однотипность результатов при повторных исследованиях. Например, повторное выделение из цервикального канала в большом количестве идентичных штаммов микроорганизмов при остром сальпингоофорите можно расценивать как обнаружение возбудителя воспалительного процесса в придатках матки. Учитывая, что взятие патологического материала проводят нестандартными тампонами, для ориентировочной оценки количественного соотношения видов микроорганизмов в ассоциации можно использовать следующие критерии при посеве тампоном исследуемого материала на половину чашки Петри с кровяным агаром:. Перейти к содержимому Главная Законодательство Россия Белгородская область Брянская область Ивановская область Костромская область Курская область Ленинградская область Москва Московская область Орловская область Смоленская область Тульская область Владимирская область Ярославская область СССР Форум Архив. Документ по состоянию на август г. В целях совершенствования микробиологических бактериологических лабораторных исследований в лечебно-профилактических учреждениях, повышения уровня и эффективности микробиологической диагностики: Министрам здравоохранения союзных и автономных республик, заведующим краевыми, областными отделами здравоохранения, начальникам главных управлений здравоохранения Московского, Ленинградского, Киевского и Ташкентского горисполкомов и Московского облисполкома: Разрешается размножить Приказ в необходимом количестве. ИСАКОВ Приложение 1 к Приказу Министерства здравоохранения СССР от 22 апреля г. N Перечень унифицированных микробиологических методов исследования 1. Микробиологические методы исследования биологического материала. Микробиологические методы исследования крови. Микробиологические методы исследования спинномозговой жидкости. Микробиологические методы исследования желчи. Микробиологические методы исследования мочи. Микробиологические методы исследования отделяемого дыхательных путей. Микробиологические методы исследования открытых инфицированных ран. Микробиологические методы исследования отделяемого глаз. Микробиологические методы исследования отделяемого ушей. Микробиологические методы исследования материалов при аутопсии. Микроскопические методы окраска препаратов. Культуральные методы питательные среды. Взятие исследуемого материала 1. При наличии у больного постоянного подключичного катетера или капельницы в вене можно воспользоваться ими для получения крови. Некоторому количеству крови дают свободно стечь в пробирку эту кровь можно использовать для биохимических анализов , затем набирают кровь в шприц для посева. Для полноценного бактериологического анализа нужно получить 12 - 20 мл крови, которую тут же засевают на набор питательных сред. Врач-бактериолог должен следить за соблюдением правил асептики на всех этапах взятия и посева крови. Если возникает подозрение, что в какой-то момент в посев крови могли попасть микроорганизмы из внешней среды с кожи больного, с рук персонала, из воздуха и т. Посев исследуемого материала Рекомендуется производить посев крови на несколько питательных сред, чтобы обеспечить возможность роста максимально большему числу возможных возбудителей. Питательные среды для первичного посева: Жидкая среда Сабуро служит для выявления грибковых септических состояний. Оценка результатов При наличии роста результаты оцениваются в зависимости от вида выделенных бактерий, скорости и массивности роста. Как правило, менингит вызывается только одним микроорганизмом. Взятие исследуемого материала Для бактериологического анализа обычно используют спинномозговую жидкость, взятую при люмбальной пункции или при пункции боковых желудочков мозга. Микроскопия исследуемого материала Спинномозговую жидкость центрифугируют 5 минут при об. Окраска по Граму в модификации Калины препаратов из ликвора и культур. Хранить во флаконе с резиновой пробкой. Окраска мазка На обезжиренное стекло наносят каплю воды. Посев исследуемого материала Так как гнойные менингиты имеют различную этиологию, то при исследовании спинномозговой жидкости с неопределенным возбудителем необходимо производить посев ликвора на несколько питательных сред с целью выделения более широкого спектра возбудителей. Питательные среды для первичного посева 1. Агар с гретой кровью шоколадный агар. Проводят посев 2 - 4 капель гнойного ликвора или ресуспензированного осадка на чашку со свежеприготовленным сывороточным агаром, на чашку с кровяным агаром, простым агаром, на среду для контроля стерильности. Капли материала слегка растирают подогретым шпателем на поверхности агара. Для этого чашки помещают в эксикатор, в 2 котором создается повышенное содержание CO за счет горящей свечи. При подозрении на H. Оценка результатов исследования Спинномозговая жидкость является стерильной средой, поэтому выделение любого микроорганизма должно расцениваться как положительный результат. Взятие исследуемого материала Желчь собирают при зондировании в процедурном кабинете отдельно по порциям A, B и C в три стерильные пробирки, либо во время операции с помощью шприца в одну пробирку, соблюдая правила асептики. Посев исследуемого материала Питательные среды для первичного посева: Селенитовый бульон для накопления сальмонелл или шигелл. Оценка результатов Наиболее достоверным является исследование желчи, полученной во время операции. Взятие исследуемого материала Исследованию подлежит средняя порция свободно выпущенной мочи, взятой в количестве 3 - 5 мл в стерильную посуду после тщательного туалета наружных половых органов. Посев исследуемого материала Питательные среды 1. Оба раствора хранят в защищенном от света месте. Непосредственно перед исследованием оба раствора смешивают в равных количествах, 1 мл смеси добавляют к 1 мл мочи. Появление красного 5 окрашивания свидетельствует о присутствии в 1 мл мочи не менее 10 микробных клеток. При постановке реакции пользуются стерильной посудой. После 4-часовой инкубации учитывают результаты. Появление на дне пробирки красного осадка свидетельствует о 5 наличии в 1 мл мочи не менее 10 микробных клеток. Оценка результатов исследования Основной задачей при интерпретации полученных данных является доказательство этиологической роли условно-патогенных микроорганизмов. С этой целью используют следующие критерии: Степень бактериурии, не превышающая 10 микробных клеток в 1 мл мочи, свидетельствует об отсутствии воспалительного процесса и обычно является результатом контаминации мочи. Степень бактериурии, равная 10 микробных клеток в 1 мл мочи, расценивается как сомнительный результат. Степень бактериурии, равная и выше 10 микробных клеток в 1 мл мочи, указывает на наличие воспалительного процесса. Взятие исследуемого материала Материалом для изучения этиологии заболеваний дыхательных путей служат: Микроскопия исследуемого материала Из мокроты или материала, взятого стерильным ватным тампоном, одновременно с посевом приготавливают мазки, окрашивают их по Граму и микроскопируют с иммерсионным объективом. Посев исследуемого материала Питательные среды. Могут быть использованы дополнительные питательные среды: Исследование на дифтерию - Приказ МЗ СССР N от 26 июня г. Гомогенизацию можно проводить в ступке, растирая мокроту со стерильным кварцевым песком, добавляя питательный бульон до конечного разведения 1: Из полученной эмульсии мокроты 1: Посев осуществляют в обратном порядке с большего -7 -5 -3 -1 разведения. Параллельный посев из указанных разведений на кровяном агаре помещают в эксикатор с горящей свечой. Посев на желточно-солевой агар, среду Эндо и Сабуро делают из исходного разведения 1: На 2-ые сутки чашки просматривают и подсчитывают каждый вид микроорганизма. Количество микроорганизмов определяют в максимальном разведении мокроты, в котором еще удалось обнаружить данный вид бактерий. На кровяном агаре выросли 3 колонии пневмококка при посеве -5 0,1 мл мокроты с разведения Диагностически значимым является обнаружение пневмококка и гемофильной палочки до антибактериальной терапии в 1 мл мокроты в 6 концентрации 10 и выше. Аналогичные концентрации значимы и для условно-патогенных микроорганизмов в случае 2 - 3-кратного обнаружения с интервалом 3 - 5 дней. При количественном подсчете бактерий бронхиальные смывы, представляющие собой гомогенную взвесь, условно принимают за разведение 1: Диагностически значимым является обнаружение пневмококков и 4 гемофильной палочки до антибактериальной терапии в концентрации Оценка результатов При воспалительных процессах дыхательных путей, когда высеваются условно-патогенные микроорганизмы, интерпретация полученных результатов представляет определенные трудности. Для ориентировочной оценки количественного роста микроорганизмов в ассоциации целесообразно пользоваться следующими критериями: I - очень скудный рост - рост единичных колоний до 10 ; II - скудный рост - рост 10 - 25 колоний; III - умеренный рост - рост множества сосчитываемых колоний не менее 50 ; IV - обильный рост - сплошной рост несосчитываемых колоний. Взятие исследуемого материала Взятие материала производит лечащий врач при соблюдении правил асептики. Микроскопия исследуемого материала Материал, взятый одним из стерильных ватных тампонов, "размазывают" по стерильному предметному стеклу, окрашивают по Граму и просматривают под микроскопом. Взятие материала Материал забирают с пораженных мест в разгар воспалительного процесса с соблюдением правил асептики. Микроскопия исследуемого материала Бактериоскопия окрашенного материала. Оценка результатов При интерпретации результатов микробиологического исследования глаз необходимо учитывать контингент обследованных больных, анамнез, клинические проявления болезни. Микроскопия исследуемого материала 1. Посев исследуемого материала Так как хронические гнойные отиты вызываются различными микроорганизмами, в первый день исследования необходимо производить посев на несколько питательных сред. Шоколадный агар при обследовании грудных детей. Материал тщательно втирают в поверхность плотных питательных сред. На второй день просматривают сделанные накануне посевы. Оценка результатов При выявлении специфических возбудителей интерпретация результатов не вызывает трудностей. В менопаузе вновь доминируют микроорганизмы кокковой группы. Кроме того, у многих здоровых женщин во влагалище можно обнаружить следующие условно-патогенные микроорганизмы, в норме обитающие в кишечнике или в других областях тела: Escherichia coli, Streptococcus гр. B, D, Staphylococcus aureus, Haemophilus vaginalis, представители родов Klebsilla, Clostridium, Chlamidium, Bacteroides, Candida, Mycoplasma. Полость и придатки матки в норме стерильны. Взятие исследуемого материала Взятие материала для микробиологического исследования проводит врач акушер-гинеколог при подозрении на инфекционную природу патологического процесса. Микроскопия исследуемого материала В лаборатории доставленные мазки исследуемого материала окрашивают по Граму и микроскопируют с иммерсионным объективом. Оценка результатов Интерпретация результатов микробиологического исследования материалов, полученных при обследовании половых органов женщин, представляет определенные трудности, так как чаще всего регистрируют рост нескольких видов условно-патогенных микроорганизмов. Учитывая, что взятие патологического материала проводят нестандартными тампонами, для ориентировочной оценки количественного соотношения видов микроорганизмов в ассоциации можно использовать следующие критерии при посеве тампоном исследуемого материала на половину чашки Петри с кровяным агаром: I - очень скудный рост - рост только на жидких средах; на плотной питательной среде рост отсутствует II - скудный рост - на плотной питательной среде рост до 10 колоний микроорганизмов определенного вида III - умеренный рост - на плотной питательной среде рост от 10 до колоний Страницы документа:. Постановление Пленума Верховного Суда РФ от Нужно ли предоставлять учебный отпуск при дистанционном обучении? Банк России ГД ФС РФ ГТК России Закон Минтранс России Ответ на частный запрос Перечень Письмо План Положение Порядок Постановление Правительство Москвы Правительство РФ Правительство Санкт-Петербурга Президент РФ Приказ Программа Распоряжение Регламент Решение Тариф Указ Утратил силу ФТС России Каким образом устанавливается временное ограничение запрет на выезд должников за рубеж? Как оформить договор займа между физическими лицами? При каких условиях и в какие сроки исключительное право на товарный знак вводится в использование? Как унаследовать земельный участок?
Форма уведомления роскомнадзор образец
Карта г сумы с улицами и номерами
Как дешевле доехать
Направляю Вам предварительный отчет о применении в клиниках Института препарата «виватон» ио результатах исследований, проведенных в лабораториях института в процессе лечения больных этим препаратом
Мастер и маргарита начало романа текст
Катюша для рыбалки своими руками размеры
Загс в радужном тамбов расписание
Методические рекомендации. Микробиологическая диагностика кампилобактериоза
Основные причины многообразия теорий о происхождении права
Замена грм рено меган 1.6своими руками
РЕЕСТР ДЕЗСРЕДСТВ
Схема hyundai h 1419
Сколько стоит протезирование имплантах
Врач лечащий сосуды как называется
Биор-1
Проверка патент москва