Ссылка на файл: >>>>>> http://file-portal.ru/Методы определения активности ферментов/
Справочник химика 21
Определение активности ферментов
Методы определения активности ферментов
Одним из активаторов амилазы, т. Для количественной оценки влияния активатора либо ингибитора на амилазу определение активности фермента проводится в присутствии каждого из них в отдельности и результаты [c. Количественное определение ферментативной активности. Фосфатазы — ферменты, ускоряющие гидролиз эфиров фосфорной кислоты. Щелочной фосфатазой именуют фосфа-тазу, оптимум pH которой находится в щелочной среде. В организме субстратом действия этого фермента есть фосфоглицериновая кислота. Для обнаружения фосфатаз и их количественного определения применяют в качестве субстратов такие бесцветные эфиры фосфорной кислоты. Активность фосфатазы оценивают по интенсивности окраски. Примером для того чтобы субстрата есть нитрофенилфосфат. Перед тем как приступить к выделению и очистке того либо иного фермента. Прямые способы существуют только для весьма ограниченного круга ферментов, исходя из этого применяют свойство ферментов катализировать специфическую реакцию. Дабы иметь возможность контролировать степень очистки фермента. Способы выделения амилаз из покоящихся и проросших семян основаны на настаивании размолотых семян с водой либо не сильный раствором нейтральных солей. Наряду с этим большинство амилаз переходит в вытяжку. Очищают ферменты значительно чаще высаливанием из растворов сульфатом аммония. Раздельное количественное определение активности амилаз основано на разной термолабильности а- и -амилаз. Некоторое понижение активности а-амилазы, которое возможно в таких условиях, практического значения не имеет. Ферменты, выделяемые в слюну бактериями, к примеру альдолаза и щелочная фосфатаза. Электрофоретический способ отличается простотой исполнения и избирательностью. Это единственный из известных способов оценки активности рестриктаз, в следствии применения которого имеется возможность делать выводы о характере расщепления субстрата — любая специфическая эндонуклеаза генерирует неповторимый комплект фрагментов ДНК субстрата, который по окончании проведения электрофоретического их разделения дает определенный, характерный для этого фермента комплект территорий в геле. Рассмотрение таких картин разрешает делать выводы не только о наличии рестриктазы в исследуемом растворе, но частично и об ее активности и субстратной специфичности. Последнее свойство обсуждаемого способа оказывается крайне важным в тех случаях, в то время, когда в фракционируемой смеси содержится более чем одна рестриктаза. Помимо этого, понижение интенсивности и четкости территорий ДНК разрешает делать выводы о наличии в фракциях неспецифических нуклеаз. Но, электрофоретический способ наровне с отмеченными преимуществами имеет значительный недостаток, выражающийся в том, что количественное определение активности исследуемых ферментов проводится методом оценки перехода неполное расщепление—полное расщепление субстрата. Чтобы идентифицировать данный переход, нужно проводить обработку субстрата разными количествами фермента. В случае если учесть, что в ходе хроматографической очистки таковой оценке подлежат многие десятки фракций, трудоемкость количественного определения активности рестриктаз электрофоретическим способом в таких опытах делается очевидной. Но применение как раз этого способа оправдывает себя в случае определения активности конечного препарата, предназначенного для применения в качестве аналитического реагента. В этом случае нужно знать количество фермента. Нетрудно кроме этого видеть, что все рассмотренные способы количественного учета ферментов дают представление не об безотносительном количестве фермента. Но для практических целей и эти относительные показатели имеют громадную ценность. Так, при количественном определении пепсина в. Но количественные определения в этих условиях весьма затруднены, по причине того, что в опытах на интактных препаратах ни при каких обстоятельствах запрещено с уверенностью оценить концентрацию субстрата в местах размещения фермента. Авторы уверены в том, что ингибиторы смогут быть разбиты на два класса а простигмин. Согласно точки зрения авторов. Нужно подчернуть, что различие между простигми-ном и декаметонием. Приведенные данные тяжело трактовать вследствие того что в них не видно зависимости между проницаемостью и ионизацией. Было бы весьма интересно провести аналогичное изучение с более тщательным подбором условий в отношении концентрации веществ и времени их действия. Более значительной проблемой есть отсутствие данных [c. Ферментативная активность церулоплазмина была в первый раз обрисована Холмбергом и Лоуреллом [46], каковые продемонстрировали, что это единственный фермент, катализирующий окисление полиаминов и полифенолов в плазме. Катализируемая церулоплазмином реакция окисления п-фенилендиамина и других подобных соединений употребляется в большинстве случаев для количественного определения белка в растворе [31, 47, 48]. Но не было увидено, дабы церулоплазмин игрался сколь -нибудь значительную физиологическую роль при окислении таких серьёзных биологических субстратов, как адреналин. Как правило метод обнаружения фермента пребывает в том, что электрофореграмму разрезают на маленькие участки, элюируют из них фермент и определяют его активность простыми способами. Такая методика разрешает проводить количественное определение ферментативной активности. С позиций разрешающей способности более предпочтительными являются способы локализации ферментов in situ. Краткое описание таких способов дается в настоящей главе. Более того, соотношение изоферментов, определенное при электрофорезе, отличается от их соотношения при измерении другими способами. Меньшие количества фермента обнаруживали более высокую относительную активность. При электрофорезе в микрогелях изоферментов глюко-зофосфатдегидрогеназы аналогичных отклонений не наблюдалось []. В этом случае субстраты, коферменты, сопрягающие агенты и другие низкомолекулярные соединения весьма быстро попадают в гель, благодаря чему обеспечивается постоянный избыток субстрата и других реагентов. Так, микрогель возможно разглядывать как микрокювету и применять его для количественного определения пикограммовых количеств ферментов, и для изучения кинетики ферментативных реакций. Детальное описание этих способов дается в работе Нейхоффа []. Модная красивая Menu Здоровье Диета Зубы Кожа Питание Фитнес Болезни и лечение Красота Лицо Макияж Ногти Прически Волосы Косметика Ароматы Медицина Подарки Отношения Свадьба Беременность и дети Психология Карта сайта. Похожие новости Беременность и гломерулонефрит Комментариев нет Авг 18, Комментариев нет Сен 14, Комментариев нет Ноя 9, Комментариев нет Дек 14,
Sony vegas pro самоучитель
Результаты методики басса дарки
Что приготовить из замороженного слоеного теста
16.Методы определения и способы выражения активности ферментов.
Черты и характеристика героя шуруп
Как убрать синяки под глазами с помощью
5 способов решения конфликта
Методы определения активности ферментов
Сколько стоит логотип у фрилансера
Базовые упражнения на руки
Методы определения активности ферментов
Худеем правильно и быстро в домашних условиях
Сигнализация пандора инструкция dxl
Жирная моча у ребенка причины
Методы определения активности ферментов
Стих любите женщину