Бактериологический метод исследования: этапы, цели, характеристика
Бактериологический метод исследования
Бактериологическое исследование
Комплексное лабораторное изучение микрофлоры включает бактериоскопическое и бактериологическое исследования материала, проводимые в динамике при поступлении на стационарное лечение, в процессе лечения, а также по показаниям у больных, лечащихся амбулаторно. Посевы диагностического материала целесообразно производить на плотные питательные среды, что исключает подавление роста одного микроорганизма другим и позволяет дать количественную оценку числа выросших колоний. Интенсивность роста микроорганизмов может выражаться в крестах и соответствовать содержанию определенного количества микробных клеток в 1 мл диагностического материала:. Исследование микрофлоры верхних дыхательных путей глотка, нос, ротовая полость. Материалом для исследования служат: Материал для микробиологического исследования из ротовой полости забирают натощак стерильным ватным тампоном со слизистой оболочки у выхода протоков слюнных желез, поверхности языка, из язвочек соскоб ложечкой , с наиболее пораженных мест. При наличии пленки последнюю снимают пинцетом. Материал из носовой полости забирают сухим стерильным ватным тампоном. Материал засевают на чашки Петри с кровяным, желточно - солевым агарами, среду Сабуро. При посеве тампоном материал втирают в среду со всей поверхности тампона на небольшом участке кв. Одновременно с посевом приготавливают мазки и окрашивают по Граму. Исследование микрофлоры нижних дыхательных путей. Основным материалом для исследования является мокрота, которая собирается в день исследования, утром, после чистки зубов и полоскания полости рта свежекипяченой водой. При обильном выделении мокроты первые порции следует откашлять в плевку, а последующие собираются в стерильную посуду и доставляются в лабораторию. Для изучения микрофлоры мокроты применяют как посев неразведенной мокроты качественный метод , так и метод разведения, который получил название количественного. При качественном методе для посева используются гнойные комочки мокроты, отмытые в физиологическом растворе от микрофлоры ротовой полости. При количественных методах гомогенизируется 1 мл мокроты. Затем производятся разведения, позволяющие уменьшить в ней количество микроорганизмов ротовой полости. При обоих методах одновременно с посевом приготавливается мазок, который окрашивается по Граму. Исследованию подлежат гнойная и слизисто - гнойная мокрота, в которой присутствуют лейкоциты и клетки альвеолярного эпителия, клетки, вкрапленные в муцин, присутствие которых характерно для экскрета нижних отделов дыхательных путей. Обращают внимание на преобладающую в мазке нативной мокроты микрофлору, особенно капсульные диплококки пневмококки , мелкие грамотрицательные палочки палочка Пфейффера и др. В лаборатории мокроту выливают в чашку Петри, выбирают гнойных комочка, которые однократно отмывают в физиологическом растворе, после чего засевают на кровяной и желточно - солевой агары, среды Эндо и Сабуро. Посев производят стерильным стеклянным шпателем, равномерно растирая материал на поверхности питательной среды. На чашку с кровяным агаром сразу же после посева накладывают диски с антибиотиками стрептомицином, пенициллином, тетрациклином, эритромицином и левомицетином , что позволяет получить экспресс - информацию о лекарственной чувствительности преобладающей в посеве микрофлоры. На второй день учитывают количество выросших колоний этиологически значимым считается рост более 50 колоний , однородность популяции и лекарственную чувствительность при росте их в монокультуре. Посев промывных вод бронхов, лаважной жидкости. Из исследуемого материала отбирают комочки слизи, которые без предварительного отмывания в физиологическом растворе засевают на плотные питательные среды см. При отсутствии комочков слизи производят посев материала, набранного в пастеровскую пипетку. Инкубация в течение суток при 37 град. Пробы на исследование отбирает врач стерильным ватным тампоном или стеклянной палочкой. В случае отсутствия роста через 48 часов выдается отрицательный ответ. Исследование мазков из уха. Материал забирают стерильным ватным тампоном из слухового канала и производят посев на кровяной и желточно - солевой агары, среду Сабуро, втирая материал на участке среды, после чего растирают по всей чашке. Исследованию подлежит средняя порция утренней мочи, полученная при нормальном мочеиспускании или взятая катетером. Показателем бактериурии, имеющим клиническое значение, считается наличие и более микробов в 1 мл мочи. При этом в участке среды сектора А делают посев, равномерно втирая материал по всей поверхности, затем не беря нового материала, этой же петлей делают посев штрихами на питательную среду в секторе I штриха , из сектора I во II, из II сектора - в III. Определяют степень бактериурии по табл. При наличии менее тыс. Появление роста колоний в I секторе указывает на более высокую степень бактериурии. Подсчет колоний в секторе с наименьшим ростом не представляет труда. Метод секторных посевов в большинстве случаев позволяет уже на второй день исследования выделить возбудителя заболевания в чистой культуре. Исследование микрофлоры ран, пунктатов, экссудатов, резецированных тканей. Экссудаты и пунктаты засевают пастеровской пипеткой в пробирки с кровяным и простым мясопептонным агаром, сахарным бульоном. Материал втирается по краю среды, а затем рассеивается по чашке при помощи этого же тампона или бактериологической петли. Исследование микрофлоры женских половых органов. Желчь собирают при зондировании или во время операции в стерильные пробирки и доставляют в лабораторию не позднее 2 ч. Посевы и оставшийся исходный материал помещают в термостат при 37 град. Через 24 часа учитывают результаты первичных посевов с подсчетом количества колоний каждого вида на плотных питательных средах. Кровь сеют у постели больного после тщательной обработки кожи спирт, эфир. Из локтевой вены берут 10 мл крови, которую выливают в две колбы: Посевы выдерживают в термостате в течение 10 дней. Посев 5 мл крови можно произвести во флакон с питательной средой в двух фазах: Такая методика исключает необходимость многократных пересевов, устраняет возможность загрязнения посева микрофлорой окружающей среды, позволяет учесть количество выросших колоний то есть оценить напряженность бактериемии. Посев помещают в термостат при 37 град. С на 10 суток. Ежедневно содержимое флаконов взбалтывают и наклоном флакона смачивают поверхность скоса плотной питательной среды. При появлении роста колоний на скосе кровяного агара с них приготавливают мазки и далее идентифицируют по общепринятым в бактериологии правилам. При отсутствии роста микроорганизмов на е сутки дается окончательный ответ - посев крови стерилен. Исследование на дисбактериоз кишечника. На предварительно подготовленные и взвешенные подпергамент или вощанку стерильные бумажки размером 3х2 берут произвольное количество фекалий и взвешивают на торзионных весах. Бумажку вместе с материалом помещают в стерильную пробирку. Вес навески фекалий, за вычетом веса бумажки, умножают на 9. Полученная после умножения сумма равна количеству физиологического раствора, которое необходимо добавить в пробирку. Методы идентификации микроорганизмов основаны на изучении морфологических, культуральных и биохимических, антигенных и др. Морфологические свойства изучаются путем бактериоскопии диагностического материала и мазков из колоний, выросших на плотных и жидких питательных средах культур. Мазки на предметных стеклах фиксируют на пламени горелки или в жидких фиксаторах 96 град. При просмотре мазков из мокроты оценивают всю имеющуюся микрофлору: Бактериоскопическое исследование является ориентировочным. Дальнейшее исследование включает посев материала на питательные среды, выделение чистых культур, их идентификацию и определение лекарственной чувствительности. Культуральные свойства изучают при просмотре выросших культур на плотных и жидких питательных средах. На плотных средах учитывают размер колоний, цвет, прозрачность, форму, наличие пигмента, гемолиз вокруг колонии и его характер и т. На жидких средах отмечают их прозрачность, наличие осадка придонный рост или пленки на поверхности среды. Исследование биохимических свойств основывается на определении ферментативной сахаролитической активности, способности утилизировать питательные вещества в аэробных и анаэробных условиях культивирования. Антигенные свойства культур изучаются при взаимодействии бактерий и их антигенов с соответствующими антисыворотками реакции агглютинации, иммунофлюоресценции и др. После изучения морфологических и культуральных свойств осуществляют постановку дифференциальных тестов с чистыми культурами микроорганизмов. Грамположительные кокки относятся к семейству Micrococcaceae , включающему род Micrococcus и Staphylococcus и семейства Streptococcaceae. Для медицинской микробиологии необходимо дифференцировать стафилококки от микрококков. Изучают морфологические свойства, гемолиз, способность расти на среде с солью, пигментообразование, ферментацию глюкозы до кислоты в анаэробных условиях, ферментацию глицерина. Микрококки имеют в раза больший размер клеток 0,,5 мкм , не ферментируют глюкозу в анаэробных условиях и глицерин, имеют пигмент от желтого до розового. Дифференциация различных видов стафилококка осуществляется по комплексу тестов: Для выделения стафилококка исследуемый материал засевают на дифференциально - диагностическую среду: При окраске по Граму стафилококк окрашивается грамположительно и располагается одиночно, попарно или образует скопления в виде неправильных кучек. При росте на мясопептонном бульоне вызывает его равномерное помутнение и дает хлопьевидный осадок. На плотных питательных средах стафилококк растет в виде круглых блестящих колоний с ровными краями 0,,5 мм в диаметре. На второй день исследования оценивают количественный рост выросших колоний, учитывают лецитиназную активность, выделяют чистую культуру микроба пересев на пробирки с молочным или простым скошенным агаром. На третий день - ставят тесты для дифференциации и на лекарственную чувствительность. При определении коагулазной активности пользуются лиофилизированной плазмой крови кролика, разведенной стерильным физиологическим раствором 1: В пробирку засевают 1 петлю суточной агаровой культуры исследуемого штамма и помещают в термостат при 37 град. Учет результатов производят через 30 мин. Положительными считаются все степени свертывания плазмы от небольшого сгустка, остающегося неподвижным при перевертывании пробирки. Лецитиназная активность определяется на желточно - солевом агаре. Учет реакции производят через часов макроскопически по наличию мутной зоны и радужного венчика вокруг колоний стафилококка, что свидетельствует о наличии у них фермента лецитиназы. При ферментации маннита столбик агар синеет. Учет через часов. Положительный гемолитический тест на агаре с кровью человека, как правило, обусловлен гемотоксинами, тогда как основную роль в патогенезе стафилококковых инфекций играет альфа - токсин, который можно выявить на агаре с кровью кролика. Стрептококки представляют собой большую и довольно гетерогенную группу микроорганизмов. Наиболее изученными являются аэробные представители: Микроб имеет сферическую форму, грамположителен, в мазках с плотных питательных сред располагается в виде коротких цепочек из кокков, на жидких питательных средах дает более длинные цепочки. При выращивании стрептококков следует учитывать их повышенную потребность в питательных веществах. На кровяном агаре стрептококк растет в виде мелких, прозрачных с гладким краем колоний. Отношение к кровяному агару является одним из важнейших свойств стрептококков, в значительной мере определяющих их патогенность. Качество гемолиза определяется через 24 ч. С в течение 24 часов зона гемолиза не увеличивается. Альфа - зеленящие стрептококки Str. На сахарном бульоне стрептококки растут придонно и пристеночно, оставляя бульон прозрачным. Образуют хлопьевидный, иногда гомогенный осадок. По Ленсфилд, дифференциация стрептококка осуществляется с помощью реакции преципитации по наличию полисахаридного антигена. Стрептококки группы А дают гемолиз на кровяном агаре, не редуцируют метиленовую синь в молоке, чувствительны к пенициллину. Энтерококк является обитателем кишечника человека, однако может вызывать энтероколиты, циститы и пр. В отношении углеводов стрептококки не активны. Стрептококк нередко погибает во время пересевов. При необходимости чистую культуру стрептококка можно выделить путем пересева типичной колонии секторами на чашку Петри с кровяным агаром. Пневмококк, как и другие стрептококки, может быть причиной гнойных процессов в любом органе гнойный отит, гайморит, ангина и т. Из диагностического материала кроме крови обязательно приготавливаются мазки, окрашенные по Граму. Обнаружение в них грамположительных капсульных диплококков свидетельствует о наличии пневмококка. При работе с кровью человека в среду добавляют дрожжевой экстракт. Питательные среды хранятся не более 2 недель. Посевы просматривают после инкубации при 37 град. С в течение часов. На кровяном агаре колонии пневмококков нежные, мелкие, зеленовато - серые, окружены ореолом, напоминающим гемолиз. Характерно вдавление в центре колонии. На сахарном бульоне пневмококк дает тонкое равномерное помутнение, иногда небольшой осадок. Ферментация инулина имеет дифференциально - диагностическое значение для определения этого вида стрептококка. Жизнеспособность пневмококков непродолжительна, они быстро погибают при воздействии обычных дезинфицирующих средств, особенно чувствительны к желчи и ее солям. Стрептококк, колонии которого сходны с пневмококком, не лизируется желчью. Пробирку помещают на ч. Просветление содержимого пробирки лизис микроба позволяет отнести исследуемую культуру к пневмококкам. Грамотрицательные кокки и коккабациллы представлены родами: К роду Neisseria относятся патогенные виды - N. Менингококк является возбудителем эпидемического цереброспинального менингита, но может также вызывать сепсис, ринофарингиты и пр. Отмечено носительство микроба в носоглотке здоровых людей. Отрицательный результат исследования не говорит против инфекции, так как применение антибиотиков и сульфаниламидных препаратов значительно снизило высеваемость менингококка. В связи с этим большое значение имеет приготовление и микроскопия мазка из осадка, полученного при центрифугировании спинномозговой жидкости. Менингококк - это грамотрицательный диплококк, имеющий форму кофейного зерна, клетки обращены друг к другу вогнутыми сторонами, полиморфны. Наличие в мазках грамотрицательных диплококков бобовидной формы, расположенных внутриклеточно, свидетельствует о присутствии менингококка. На плотных питательных средах менингококк растет в виде мелких, слегка выпуклых, голубоватых колоний, с ровными краями. Через суток выращивания при 37 град. С колонии увеличиваются в размерах, и их край становится неровным. При обнаружении грамотрицательных диплококков в мокроте, мазках из зева и пр. Для этого выделенные чистые культуры микроорганизма изучают в отношении биохимических свойств Табл. Микроорганизмы родов Branchamella и Moraxella являются возбудителями конъюнктивитов человека. На кровяном агаре растут в виде мелких колоний, образующих вокруг большие темные зоны. Гемофильные палочки относятся к роду Haemophilus, включающих патогенные и непатогенные для человека виды. Они выделяются при исследовании диагностического материала верхних дыхательных путей: Бактерии инфлюэнцы - очень мелкие, чрезвычайно полиморфны от кокковидных до длинных нитевидных форм, неподвижны, грамотрицательны, хорошо окрашиваются слабыми растворами фуксина. В мазках палочки чаще располагаются в виде скоплений. Микробы неустойчивы к внешним воздействиям и быстро погибают вне живого организма. Для культивирования требуют присутствия в средах факторов роста X и Y. X-фактор связан с гематином и находится в крови, не разрушается при нагревании до град. Y-фактор содержится в животных и растительных тканях, вырабатывается некоторыми бактериями, термолабилен. На кровяном агаре вырастают мелкие, плоские, с выпуклым центром прозрачные колонии, иногда сливающиеся между собой, гемолиза не дают. При культивировании на среде Левинталя колонии больших размеров имеют куполообразную форму. В жидких кровяных средах микроб дает гомогенный рост с небольшим порошковидным осадком на дне. Ферментативные свойства не постоянны. Палочки инфлюэнцы сбраживают глюкозу, декстрозу, левулезу, галактозу, мальтозу и сахарозу с образованием кислоты. Они никогда не сбраживают лактозу и маннит, патогенны для лабораторных животных. К семейству Enterobacteriaceae относятся грамнегативные палочки, хорошо растущие на обычных питательных средах, подвижные или неподвижные, расщепляющие глюкозу путем ферментации, не имеющие цитохромоксидазы, редуцирующие нитраты в нитриты. После установления принадлежности штамма к Enterobacteriaceae определяют внутри семейства другие таксономические свойства. При этом основное значение имеет изучение ферментативной характеристики культур. Биохимические признаки кишечных бактерий в пределах рода непостоянны. Поэтому при идентификации используют ряд биохимических тестов, а также изучают аминокислотный метаболизм. Дифференциация проводится до определения рода микроорганизма. Принадлежность микроба к одному из родов семейства Enterobacteriaceae устанавливается по ряду биохимических тестов табл. Изучают подвижность, ферментацию глюкозы, лактозы, маннита, разложение мочевины, усвоение цитрата, разжижение желатины, образование индола и сероводорода, утилизацию малоната, дезаминирование фенилаланина, декарбоксилирование лизина. Схема дифференциации грамотрицательных бактерий представлена в табл. Посев материала производится на среды: На второй день выделяют чистые культуры микроорганизмов и приготавливают мазки. На третий день изучают биохимические свойства и лекарственную чувствительность. Производят посев на среду Олькеницкого 3-сахарный агар с мочевиной для изучения ферментации глюкозы, лактозы, разложения мочевины и образования сероводорода; в пробирку со средой Симмонса, полужидким агаром, в среды с фенилаланином, малонатом натрия, лизином, в бульон Хоттингера для определения лекарственной чувствительности опускают полоску рентгеновской пленки. При необходимости более полной идентификации набор тестов может быть увеличен. В настоящее время для идентификации грамотрицательных бактерий выпускаются системы индикаторные бумажные СИБ. Системы имеют набор для межродовой дифференциации по 9 основным биохимическим свойствам: Полная идентификация до рода включает 25 биохимических тестов. В отношении питательных сред непритязательна. На поверхности плотных питательных сред кишечная палочка растет в виде круглых, серовато - голубоватых малиново - красных на среде Эндо колоний с металлическим блеском, некоторые штаммы дают гемолиз на кровяном агаре. В бульоне - равномерное помутнение, к концу первых суток образуют индол. Первичное распознавание кишечной палочки основывается на ее способности разлагать с образованием кислоты и газа глюкозу, лактозу, маннит. Способность кишечной палочки сбраживать лактозу с образованием кислоты и газа отличает ее от других представителей кишечной группы. Чистую культуру микроба выделяют на скошенный мясопептонный агар. Для определения сахаролитических свойств культуру с агара пересевают в среду Олькеницкого, в пробирку с маннитом. Посинение среды и пузырьки газа свидетельствуют о ферментации глюкозы, лактозы и маннита. Кишечная палочка не растет на среде Симмонса, не образует сероводорода. Идентификация осуществляется по общей схеме. В отличие от микробов рода Escherichia, Citrobacter растут на среде Симмонса, образуют сероводород. Капсульные бактерии Klebsiella - Enterobacter. Капсульные бактерии рода Klebsiella являются возбудителями пневмонии, риносклеромы, озены. Бактерии рода Enterobacter вызывают заболевания почек и мочевыводящих путей, поражения желудочно - кишечного тракта. Капсульные бактерии представляют собой неподвижные, грамотрицательные палочки с закругленными концами. Располагаются попарно или одиночно и окружены капсулой, которая хорошо выявляется как в патологическом материале, так и в культуре наблюдаются и бескапсульные варианты. Микробы неприхотливы и хорошо культивируются на обычных питательных средах, растут в виде слизистых, выпуклых серовато - желтых колоний, нередко сливающихся между собой. В бульоне дают диффузный рост, могут образовывать осадок, пленку на поверхности или кольцо - на стенке пробирки. Биохимические свойства изучают в соответствии с принципами идентификации энтеробактерий. По своим свойствам бактерии рода Klebsiella практически неотличимы от Enterobacter. Они слабо расщепляют мочевину, утилизируют цитрат в среде Симмонса и малонат, не образуют сероводород, не имеют дезаминазы фенилаланина, различаются по подвижности, разжижению желатины. Следует учитывать материал, из которого выделен микроорганизм Klebsiella чаще из мокроты, Enterobacter - из фекалий и мочи. Выделенные культуры капсульных бактерий окрашивают по Граму и Гинсу с целью выявления капсул. Биохимические свойства бактерий этого рода изменяются в зависимости от температуры выращивания. Растут на обычных питательных средах: Образуют серовато - розовые колонии. Не ферментируют лактозу, не образуют индол и сероводород, слабо растут на среде Симмонса, образуют лизиндекарбоксилазу, дают положительную реакцию с метиловым красным при 37град. Чудесная палочка Serratia marcescens - грамотрицательная, почти сферическая. На агаре дает нежные округлые колонии, подвижна. Разжижает желатину, сероводорода и индола не образует. Микроб представляет собой довольно короткую, подвижную грамотрицательную палочку. Хорошо растет на обычных питательных средах. Может давать как изолированные, так и расплывающиеся по поверхности агара колонии ползучий рост. Большинство свежевыделенных штаммов протея обладает слабой биохимической активностью: Особенностью протея, которая используется при дифференциации, является способность разлагать мочевину. После посева протея на среду Олькеницкого с мочевиной последняя приобретает ярко - оранжевое окрашивание. Микробы рода Proteus обладают дезаминазой фенилаланина и разжижают желатину. Микробы этого рода грамотрицательные, подвижные или неподвижные палочки, утилизируют цитрат на среде Симмонса, имеют фермент фенилаланиндезаминазу. В отличие от протея не гидролизуют мочевину. Неферментирующие грамотрицательные бактерии НГОБ. Группа характеризуется отсутствием способности осуществлять процессы брожения и включает неферментирующие ГОБ различных родов и семейств Pseudomonas, Alcaligenes, Moraxella, Actinetobacter, Flavobacterium. Культуру засевают в 2 пробирки уколом и одну из них заливают вазелиновым маслом - кислотообразование в обеих пробирках свидетельствует об усвоении углеводов за счет анаэробного расщепления, только без маслоаэробного табл. Moraxella - крупные слизистые колонии, иногда капсула, повышенная чувствительность к большинству антибиотиков за исключением линкомицина. Flavobacterium 12 видов - коккабациллы, растут на простых средах, матовые, желтые, оранжевые, красные, коричневые. Пигмент зависит от температуры, появляется на 7-й день. Имеют повышенную чувствительность к новобиоцину, эритромицину, хлорамфениколу. Acinetobacter - растут на кровяном и простом агарах - крупные, белые, круглые, слизистые, иногда гемолиз. Синегнойная палочка относится к семейству Pseudomodaceae, представляет собой подвижную, грамотрицательную палочку. На плотных питательных средах она дает крупные плоские слизистые колонии, иногда с гемолизом и металлическим блеском. На жидких питательных средах характерно равномерное помутнение и нежная пленка на поверхности. В отношении углеводов синегнойная палочка не активна, ферментирует только глюкозу с образованием кислоты без газа. Характерной особенностью синегнойной палочки является пигментообразование. Чаще всего она выделяет сине - зеленый пигмент, но описаны также черный и красный пигменты. Признак пигментообразования непостоянен, встречаются и бесцветные штаммы микроба. Культура синегнойной палочки имеет цветочный запах, напоминающий запах фиалок или земляничного мыла; бесцветные штаммы издают неприятный аммиачный запах. Характерным признаком является наличие фермента цитохромоксидазы. Определение чувствительности микроорганизмов к антибиотикам. При определении лекарственной чувствительности необходимо пользоваться чистой культурой возбудителя. Выделение чистой культуры микроба особенно важно в случаях, где имеется обильная сапрофитная микрофлора например, мокрота. Для определения чувствительности микроорганизмов к химиотерапевтическим препаратам рекомендуются методы диффузии в агар с применением бумажных дисков и метод серийных разведений в двух модификациях на плотной и жидкой питательных средах. Метод основан на диффузии антибиотика из небольшого фокуса лунка в агаре, стандартный диск из фильтровальной бумаги, пропитанный антибиотиком в плотную питательную среду, обычно агар в чашке Петри. Метод диффузии в агар антибиотика из луночек или цилиндриков значительно сложнее, чем использование дисков. Наиболее удовлетворительным и приемлемым для клинических целей считается метод с использованием дисков из фильтровальной бумаги, помещенных на поверхность среды в чашке Петри. Этот метод требует наименьшего труда и при соблюдении стандартности опытов дает достаточно точные результаты. Количество любого антибиотика в дисках зависит от абсолютной активности препарата, скорости, с которой антибиотик диффундирует в среду, концентраций, достигаемых in vivo, и терапевтических концентраций, при различных инфекциях. Для большинства антибиотиков содержание их в диске колеблется от 1 мкг до 50 мкг. В практических условиях рекомендуется пользоваться стандартными дисками, выпускаемыми промышленностью. Определение чувствительности проводится на одной из следующих питательных сред: Для определения чувствительности в стерильные чашки Петри разливают по 20 мл одной из вышеуказанных питательных сред. Затем на поверхность агара засевают суспензию суточной агаровой культуры исследуемого микроба в сахарном бульоне 1 млрд. Покачиванием чашки культуру равномерно распределяют по поверхности питательной среды, а ее излишек отсасывают пастеровской пипеткой. На поверхность засеянного агара пинцетом накладывают диски с различными антибактериальными препаратами до Чашки выдерживают 30 мин. С на часов. Для избежания размывания зон задержки роста конденсационной водой чашки ставят вверх дном. Результаты оценивают по диаметру зоны задержки роста микробов вокруг дисков с антибиотиками, включая диаметр самого диска. Единичные колонии и рост микроорганизмов в виде тонкой пленки вокруг зоны задержки не учитывают. Отсутствие зоны задержки роста микробов указывает на то, что испытуемый штамм устойчив к данному препарату. Зоны диаметром до 10 мм указывают на малую чувствительность, зоны диаметром более 10 мм - на чувствительность микроба. Метод разведений является наиболее точным количественным методом определения чувствительности, так как он позволяет определять величину минимальной подавляющей концентрации антибиотика для испытуемого микроба в определенных стандартных условиях опыта величина микробной нагрузки, режим инкубации, концентрация препарата, объем питательной среды. Методом разведения пользуются в ряде случаев: Санитарно - бактериологическое исследование воздуха. Исследование воздуха производят с целью определения его общей обсемененности и присутствия санитарно - показательных микроорганизмов. Особенно важно контролировать чистоту воздуха операционных, перевязочных и других помещений хирургического отделения. В настоящее время для оценки санитарно - бактериологического состояния воздуха используют фильтрационные, аспирационные, седиментационные методы. Первые два метода наиболее точные, но требуют наличия специальной аппаратуры аппарат Кротова, прибор Дьяконова, мембранные фильтры и др. Наиболее широкое распространение в настоящее время находят седиментационный метод и аспирационный метод с применением аппарата Кротова. При отсутствии специальной аппаратуры можно пользоваться чашечным методом. Седиментационный метод механическое осаждение дает достаточно достоверные данные о бактериальной загрязненности воздуха и может быть использован в любых условиях. Общую бактериальную загрязненность воздуха количество непатогенных микроорганизмов в 1 куб. При исследовании на санитарно - показательные микроорганизмы стрептококки, стафилококки применяют элективные питательные среды - кровяной агар, желточно - солевой агар. Чашки с питательными средами в открытом виде устанавливают в горизонтальном положении и экспонируют мин. После инкубации в термостате при 37 град. С в течение часов производят подсчет и идентификацию выросших колоний. Обнаружение в воздухе гемолитического стрептококка группы А, золотистого стафилококка свидетельствует об эпидемическом неблагополучии исследуемых помещений. Допустимые нормы общей обсемененности воздуха хирургических операционных составляют микробов в 1 куб. Превышение этих показателей или обнаружение в воздухе санитарно - показательных микроорганизмов требует проведения дополнительной влажной уборки помещения с применением ультрафиолетового облучения и бактерицидных ламп, после чего воздух исследуется повторно. Свежее мясо очищенное от костей, жира и сухожилий разрезают на мелкие кусочки, заливают двойным объемом водопроводной воды и кипятят в течение часа. После кипячения дают мясной воде отстояться, фильтруют через ватный фильтр и доливают водой до первоначального объема. Приготовленную таким образом мясную воду разливают по бутылям и автоклавируют при 1 атм. Если на стенках и дне бутылки образуется осадок, то перед приготовлением бульона мясную воду снова фильтруют. PH среды до стерилизации устанавливают не ниже 8,0, так как после стерилизации среда становится более кислой, то рН в готовом бульоне будет 7,,6. Жидкость кипятят в течение 2 часов или автоклавируют 20 минут при 1,25 атм. С , после чего в горячем виде фильтруют через складчатый бумажный фильтр. Готовый мясопептонный бульон должен быть прозрачным и иметь соломенно - желтоватый цвет. После стерилизации, как и при приготовлении всех других сред, проверяют рН. Мясопептонный бульон разливают по пробиркам или флаконам и стерилизуют в автоклаве при град. Стерилизуют текучим паром 3 дня подряд по 30 мин. Среду готовят впрок из расчета 5,0 сухого агара на мл дистиллированной воды. Агар разводят в кастрюле, замачивают в течение 1 часа, доводят до кипения при постоянном помешивании, фильтруют и разливают по колбам. Стерилизуют в автоклаве при град. Кровяной агар с глюкозой. Все тщательно перемешивают и разливают в чашки Петри по 20 мл. Для приготовления агара используют человеческую кровь без добавления антисептиков, кровь кролика, барана или лошади. Готовые чашки хранят в холодильнике. Среда Левинталя шоколадный агар. К растопленному и охлажденному до 60 град. С до тех пор, пока цвет агара не станет шоколадным. Желточно - солевой агар. Желток асептически извлекают из яйца, взбалтывают с мл физиологического раствора. Агар тщательно смешивают с желточной взвесью и разливают в чашки Петри. Молоко отстаивают, снимают сливки, разливают по пробиркам по 10 мл и стерилизуют текучим паром 3 дня подряд по 30 мин. Среду разливают по мл в пробирки и скашивают. Молоко с метиленовым синим. Разливают по пробиркам и стерилизуют текучим паром 3 дня подряд по 30 мин. Нежирное мясо или печень нарезают мелкими кусочками, взвешивают и заливают тройным количеством по весу питательного бульона. После кипячения в течение 30 мин. Кусочки мяса отмывают на сите водопроводной водой, просушивают и раскладывают по кусочка в пробирки и кусочков в колбочки. Кусочки мяса заливают бульоном по мл в пробирки и мл в колбочки. Стерилизуют при град. Готовая среда имеет сине - зеленоватый цвет. При росте стафилококка через 24 часа вокруг штриха с культурой среда желтеет, при росте микрококка - остается без изменения. На мл бульона Хоттингера добавляют мл дистиллированной воды и 5 г сухого питательного агара. Агар разводят в кастрюле, доводят до кипения и разливают в пробирки по 4 мл. Стерилизуют в автоклаве при 1 атм. В пробирку с 4 мл бульона Хоттингера или пептонной воды засевают исследуемую культуру бактерий, после чего опускают полоску освещенной и проявленной рентгеновской пленки размером 30х5 мм. Посевы инкубируют в термостате при 37 град. При разжижении желатины погруженная часть полоски становится прозрачной, а на дно пробирки выпадает черный осадок редуцированное серебро. Большинство бактерий, продуцирующих желатиназу, дает положительную реакцию в течение суток. При отрицательном результате посевы выдерживают в термостате суток. Полоски рентгеновской пленки для посева укладывают на дно чашки Петри, покрытой фильтровальной бумагой в 1 слой и автоклавируют при 1 атм. Среды с углеводами Гисса. Среды приготавливают из расчета 2 г сухого агара с индикатором ВР и соответствующим углеводом глюкозой, лактозой, маннитом, сахарозой, мальтозой на мл холодной дистиллированной воды, тщательно перемешивают, кипятят на слабом огне до полного расплавления агара, после чего фильтруют через ватный фильтр. Горячую среду разливают в пробирки и стерилизуют дробно текучим паром три дня подряд по 30 мин. Горячую среду фильтруют через ватный фильтр и вновь доводят до кипения. Среду остудить до 50 град. С и разлить в стерильные чашки Петри слоем мм, после охлаждения чашки подсушивают в термостате. Горячий агар имеет бледно - розовый цвет, при застывании становится бесцветным. Среду готовят в день использования. Покрасневшая среда к употреблению непригодна. В мл дистиллированной воды растворяют 7,5 г лактозы х. Добавляют 23 г сухой среды с сахарозой и индикатором ВР. Все размешивают, кипятят, фильтруют, разливают по пробиркам так, чтобы длина столбика и скоса агара были равны. Стерилизуют при 0,5 атм. Готовая среда имеет серовато - розоватый цвет. При ферментации глюкозы и лактозы среда синеет, при разложении мочевины - приобретает оранжевое окрашивание, при образовании сероводорода появляется почернение на дне пробирки. Среда Симмонса цитратный агар. В 1 л дистиллированной воды растворяют: Приготовленную среду фильтруют и разливают в пробирки. Стерилизуют при 1 атм. Готовая среда травянисто - зеленого цвета, при росте микроорганизмов, способных утилизировать цитрат, синеет. Для приготовления сред используют прозрачную часть. Среда для определения лизинодекарбоксилазы. Разливают в пробирки по 3 мл, стерилизуют текучим паром 3 дня по 30 минут. Готовая среда травянисто - зеленого цвета, при декарбоксилировании лизина - желтого. Среда с малонатом натрия. В 1 л воды растворяют 2 г сернокислого аммония [ NH4 2SO4], 0,4 г однозамещенного фосфорно - кислого калия KH2PO4 , 0,6 г двузамещенного фосфорно - кислого калия K2HPO4 , 2 г NaCl, 3 г малоната натрия, 0,25 г глюкозы х. Растворяют при подогревании плотные части, фильтруют через бумажный фильтр и добавляют индикатор. Разливают в серологические пробирки по 2 мл. В 1 мл воды растворяют 1 г фенилаланина, 1 г двузамещенного фосфорно - кислого натрия Na2HPO4x12H2O , 5 г NaCl, 12 г агара Дифко. Растворяют при подогревании в воде, фильтруют, разливают в серологические пробирки по 2 мл, стерилизуют при град. Несколько капель индикатора добавляют на поверхность роста культуры. При дезаминировании фенилаланина образуется фенилперувинная кислота, в результате на конденсате и косяке появляется зеленое окрашивание. Навигация Главная Новости Контакты Разное Медицина и Право Законодательство Право по темам Новости от партнеров.
Бактериологическим исследованием принято называть способ обнаружения и установления природы бактериальной микрофлоры в материале, полученном от пациентов, бактерионосителей или же с объектов окружающей среды. Одновременно учитываются патогенез заболевания и места наибольшего скопления предполагаемых микроорганизмов, а также пути их выведения из организма. К примеру, при сепсисе или заболевании, на фоне которого развивается бактериемия, наиболее информативным материалом для исследования выступает кровь. Если имеются серьезные подозрения на дизентерию, у пациента берут на анализ фекалии. При пневмонии проводится анализ мокроты, а при подозрении на анаэробную инфекцию материал для исследования отбирают из глубоких слоев пораженных тканей. У всех пациентов материал для бактериологического исследования целесообразно брать до начала терапии антибактериальными и химиотерапевтическими препаратами. Забранный для бактериологического исследования биологический материал собирают в стерильную емкость, соблюдая правила асептики, не используя дезинфицирующих растворов. В максимально сжатые сроки емкость доставляют в специальную лабораторию. Транспортировку материала, предположительно содержащего возбудителей опасных инфекций, осуществляют в закрытой посуде, которую упаковывают в специальные биксы. К подобному материалу обязательно прилагают сопроводительный документ, содержащий следующие сведения: Доставленный материал необходимо исследовать максимально быстро. Начинается анализ с бактериоскопии посредством исследования под микроскопом специальным образом окрашенных мазков из взятого от больного материала. В ряде случаев уже это позволяет установить возбудителя заболевания. Чаще же бактериоскопию используют в качестве ориентировочного предварительного метода исследования. На основе получения такого быстрого результата можно сразу начать антибактериальную терапию. Для профилактики распространения инфекционных заболеваний обследуют не только больного, но и контактных с ним лиц: Бактериологическое исследование подразумевает получение чистой культуры возбудителя и установление его принадлежности к виду, роду и т. Данный метод включает в себя определенные этапы. Вначале выделяется чистая культура возбудителя с помощью посева на плотные питательные среды. Выбор питательной среды зависит от свойств предполагаемого возбудителя. На следующем этапе осуществляют исследование полученных колоний бактерий макроскопическим и микроскопическим методами. Затем из небольших фрагментов каждой из образовавшихся колоний готовят мазки, которые окрашивают по Грамму. Далее исследуют их под микроскопом, определяя свойства, присущие выделенной культуре, и проверяют ее чистоту. Оставшуюся часть колонии переносят в специальные пробирки со скошенным агаром плотной питательной средой для накопления чистой культуры с целью последующего полного изучения данной колонии. Все пробирки с агаром ставят на 18—24 ч в термостат. На 2-м этапе бактериологического исследования зачастую учитывают количество образовавшихся колоний микроорганизмов. Это имеет огромное значение при наличии у пациента заболеваний, вызываемых условно-патогенной микрофлорой. На З-м этапе бактериологического исследования проводятся идентификация выделенной чистой культуры возбудителя и установление степени его чувствительности к антибиотикам и прочим химиотерапевтическим лекарственным препаратам. Идентификацию культуры осуществляют по морфологическим, биохимическим, тинкториальным, антигенным, культуральным и токсикогенным свойствам: Поскольку в последнее время растет число лекарственно-устойчивых форм бактерий, для назначения конкретному больному рациональной химиотерапии непременно требуется определение антибиотикограммы. Она отражает чувствительность или устойчивость выделенной чистой культуры возбудителя определенного заболевания к химиотерапевтическим препаратам и антибиотикам. Для чего используют либо метод бумажных дисков, либо значительно более точный, но и более трудоемкий метод серийных разведений. В основе 1-го метода лежит выявление области подавления роста колоний микрофлоры вокруг дисков, пропитанных различными антибиотиками. При использовании методики серийных разведений определенный антибиотик разводят в пробирках, наполненных жидкой питательной средой, и помещают в них равное количество микроорганизмов. Учет результатов данного вида исследования проводят по отсутствию или наличию роста бактериальной микрофлоры в этих пробирках. Полученная в результате антибиотикограмма нередко оказывает помощь и врачам-эпидемиологам для установления идентичности штаммов микроорганизмов. При определении у пациента возможного бактерионосительства исследования осуществляют неоднократно, поскольку в единичной порции собранного биологического материала можно и не обнаружить возбудителя. Доставка материала от больного для бактериологических исследований проводится с соблюдением определенных правил. Для того чтобы провести бактериологическое исследование мочи, пациенту следует собрать ее среднюю порцию объемом 3—5 мл. Сбор материала производится в стерильный пластиковый одноразовый контейнер после тщательного туалета гениталий, без использования антисептиков. Микробы, содержащиеся в моче, активно размножаются при комнатной температуре. Данный факт нередко дает ложные результаты при определении степени их содержания в моче бактериурии. Анализ спермы для бактериологического исследования собирается пациентом в стерильную пластиковую одноразовую емкость. Срок доставки материала в бактериологическую лабораторию при комнатной температуре окружающей среды составляет 1—2 ч. Мокроту целесообразно собирать в утренние часы, до приема пищи натощак , но после проведения санации ротовой полости. Сбор материала для исследования проводится в стерильную пластиковую емкость. Забор секрета простаты для бактериологического исследования проводится квалифицированным врачом-урологом после предварительного проведения массажа предстательной железы. Перед забором данного материала пациенту рекомендуется полное половое воздержание на протяжении как минимум 2 дней. Если сбор материала от больного для исследования производится в стерильную пробирку с ватным тампоном, то перед тем как его вставить, необходимо обжечь края пробирки на спиртовке. Забор проб грудного молока для последующего бактериологического исследования осуществляется только до акта кормления ребенка или спустя 2 ч после него. В качестве подготовки к проведению забора данного материала пациентка обмывает 2 грудные железы теплой водой с мылом и насухо вытирает их чистым полотенцем. Первая порция молока объемом примерно 0,5 мл сливается. После чего, не касаясь соска руками, пациентка сцеживает по 0,5—1 мл молока из правой и левой молочных желез в отдельные стерильные емкости. Нельзя допускать длительного хранения или транспортировки грудного молока при комнатной температуре окружающей среды. В противном случае может произойти размножение микрофлоры молока, следствием чего станут значительные количественные погрешности в результатах бактериологического анализа. Важно помнить, что при регистрации бактериологического анализа грудного молока необходимо указать следующее: Забор синовиальной жидкости производится квалифицированным врачом в специально подготовленную для этого стерильную пластиковую емкость. Важно помнить, что в лабораторных условиях данная процедура не проводится. Забор отделяемого из раны в специальную одноразовую емкость, содержащую среду Эймса, осуществляется только врачом. Желчь для проведения бактериологического исследования забирается в процессе дуоденального зондирования. Ее сбор осуществляется в 3 стерильные пробирки. В ряде случаев забор желчи производится в ходе оперативного вмешательства посредством стерильного шприца в 1 пробирку. Данная процедура никогда не осуществляется в лабораторных условиях. Забор материала из зева и носоглотки мазки производится до приема пищи. Причем пациенту следует исключить чистку зубов и полоскание ротовой полости. Кал на баканализ собирают с помощью стерильной проволочной петли, обмотанной ватой, которую вводят в прямую кишку на глубину 8—10 см. Затем петлю сразу погружают в стерильную пробирку с питательной средой и отправляют в бактериологическую лабораторию. Информация на сайте предоставлена для образовательных целей и не предназначена в качестве медицинской консультации и лечения. We have detected that you are using Internet Explorer 7, a browser version that is not supported by this website. Internet Explorer 7 was released in October of , and the latest version of IE7 was released in October of It is no longer supported by Microsoft. Continuing to run IE7 leaves you open to any and all security vulnerabilities discovered since that date. In March of , Microsoft released version 9 of Internet Explorer that, in addition to providing greater security, is faster and more standards compliant than versions 6, 7, and 8 that came before it. We suggest installing the latest version of Internet Explorer , or the latest version of these other popular browsers: Firefox , Google Chrome , Safari , Opera. Забор биоматериала проводится в одноразовый контейнер со средой Эймса. Данный контейнер получают в регистратуре соответствующего лечебного учреждения. Заморозка собранного биоматериала исключается. Оцените материал 1 2 3 4 5 3 голосов. Другие материалы в этой категории: Цирроз печени Истинный цирроз печени представляет конечную, практически необратимую стадию хронических диффузных гепатитов Базедова болезнь в основном характеризуется усиленным тканевым обменом и повышенной реактивностью нервной системы…. Хронический избыток глюкокортикоидов, независимо от своей причины, обусловливает симптомы и признаки…. Бронхоспазм — состояние острой дыхательной недостаточности, которое возникает в результате бронхиальной обструкции…. Развитие гипертонического криза сопровождается следующими симптомами Перепечатка материалов с сайта строго запрещена! Unsupported Browser We have detected that you are using Internet Explorer 7, a browser version that is not supported by this website.
Проблемы с кожей к какому врачу обратиться
Сколько времени пишется огэ по обществознанию 2017
Мероприятия по правилам пожарной безопасности
Чертеж улей колоды
Побои и истязание состав преступления