Ссылка на файл: >>>>>> http://file-portal.ru/Цепная полимеразная реакция и ее диагностическое значение/
Полимеразная цепная реакция
ПЦР диагностика (полимеразная цепная реакция)
Метод ПЦР
Репетиторы Библиотека Магазин учебных работ Лента заданий Контакты. Узнай стоимость написания твоей работы. Полимеразная цепная реакция Загрузка Генетическая инженерия развивалась с момента своего появления благодаря работе многих исследователей в различных областях биохимии и молекулярной генетики. При этом долгое время главным классом макромолекул считались белки, белковая природа приписывалась и генам. Однако, в г. Эти исследования положили начало интенсивному изучению нуклеиновых кислот. Интенсивное развитие молекулярной генетики привело к разработке различных методов выделения высокоочищенных препаратов молекул ДНК вирусов и плазмид, которые помещали в клетки в биологически активной форме. Этим обеспечивалась репликация ДНК и экспрессия соответствующих генов. Ферменты, катализирующие реакции превращения ДНК, были открыты в е годы. Открытия в области молекулярной биологии, энзимологии нуклеиновых кислот и молекулярной генетики сдали предпосылками к созданию технологии рекомбинантных ДНК. Технология рекомбинантной ДНК молекулярное клонирование, генной инженерия, молекулярная биотехнология — это?? Методы молекулярной биотехнологии способны преобразовать клетки бактерий, дрожжей и млекопитающих в "фабрики" для масштабного производства любого белка. Это дает возможность детально анализировать структуру и функции белков и использовать их в качестве лекарственных средств. Одним из важнейших методов технологии рекомбинантной ДНК является полимеразная цепная реакция ПЦР. В настоящее время ПЦР широко используется как для научных исследований, так и для решения прикладных задач генотипирование, диагностика инфекционных заболеваний, судебная медэкспертиза и т. Полимеразная цепная реакция — это экспериментальный метод молекулярной биологии, который состоит в ферментативном копировании определенного участка ДНК in vitro с помощью термостабильной ДНК-полимеразы, т. Данный метод позволяет значительно увеличить малые концентрации определенных фрагментов ДНК иногда РНК в пробе. Это олигонуклеотиды длиной п. От правильного подбора праймеров зависит специфичность и чувствительность анализа. Праймеры должны быть специфичными, они не должны образовывать димеры и петли присоединяясь к противоположным концам самих себя или соединяясь друг с другом , область отжига праймеров должна находиться вне зон мутаций, делеций или инсерций в пределах той или иной специфичости, избранной в качестве критерия в каждом конкретном случае. Это смесь дАТФ, дГТФ, дЦТФ и дТТФ, которые используются Taq-полимеразой в качестве строительного материала для построения цепи ДНК. Это смесь с определенным содержанием катионов и анионов, которая обеспечивает оптимальные условия для проведения реакции и стабильность значения рН. Это препарат, содержащий ДНК с участком, который затем будет являться мишенью для копирования. Препарат должным образом подготавливается к внесению в реакционную смесь. ПЦР осуществляется в несколько этапов, первым из которых является денатурация молекулы ДНК под воздействием высокой температуры рис. Амплификация необходимого отрезка ДНК осуществляется при введении в реакционную смесь двух или более праймеров олигонуклетидов длиной п. После этого в реакционную смесь вносятся ДНК-полимераза и дезоксинуклеозидтрифосфаты, что инициирует на праймерах реакцию полимеризации вторых цепей элонгация. После окончания реакции ДНК снова подвергается денатурированию и цикл повторяется. Многократное повторение этого цикла приводит к экспоненциальному обогащению реакционной смеси молекулами ДНК-мишени. Данная реакция является цепной, так как в каждом последующем цикле в качестве матрицы выступает не только исходная ДНК, но и та ДНК, которая была синтезирована в предыдущих циклах. Теоретически за N циклов может получиться 2N молекул ДНК-мишени. Температура, при которой возможно связывание праймерного олигонуклеотида с одноцепочечной ДНК-матрицей. Эта температура зависит от типа используемого фермента. Полимеразная цепная реакция отличается высокой аналитической и диагностической чувствительностью, высокой специфичностью, быстротой получения результатов и универсальностью процедуры проведения реакций. Мультиплексная мультипраймерная ПЦР — это процесс коамплификации нескольких ДНК-матриц в одной реакционной смеси с использованием различных пар праймеров. Мультипраймерная ПЦР используется, например, для одновременного скрининга биопробы сразу по нескольким инфекционным возбудителям. Данный метод позволяет также обнаружить наличие комплекса факторов вирулентности и резистентности к антибактериальным и противовирусным препаратам. Полимеразная цепная реакция характеризуется универсальностью процедуры проведения реакции. Мультиплексная ПЦР проводится также по общей схеме, единственное ее отличие состоит в этапе добавления праймеров: Данный метод может быть реализован как с использованием стандартного оборудования для ПЦР и электрофоретического анализа продуктов амплификации, так и в формате ПЦР в реальном времени. Основными преимуществами реализации этого метода в формате ПЦР в реальном времени являются: Для подготовки пробы могут быть использованы различные методики, в результате которых происходит либо извлечение ДНК из биопрепарата, либо нейтрализация посторонних примесей в этом биопрепарате. Пробы подготавливают либо обычным кипячением в течение минут, либо при помощи проведения ферментативного протеолиза с последующими депротеинизацией и переосаждением ДНК спиртом. Некоторые методы пробоподготовки основаны на использовании ионообменников, которые сорбируют примеси, ингибирующие процесс ПЦР. В реакционную смесь вводится препарат ДНК, выбранные праймеры, водный раствор дНТФ, буфер для ДНК-полимеразы Taq-полимеразы и сама полимераза. Для амплификации можно использовать подобную программу: При использовании формата ПЦР в реальном времени амплификация и измерение количества искомой молекулы ДНК происходят одновременно, для чего используют флуоресцентные красители. В противном случае необходимо отдельное проведение третьего этапа ПЦР. С года наблюдается увеличение расходов на ПЦР-диагностику, что является показателем роста использования ПЦР в практической медицине. В настоящее время активно развивается пять основных направлений ПЦР-диагностики:. Применение такого молекулярного метода исследования, как мультипраймерная ПЦР, увеличивает частоту обнаружения мутаций, в том числе микромутаций. Это позволяет применять молекулярные методы для мониторинга минимальной остаточной болезни, прогнозирования исхода лечения. Высокоспецифичные ПЦР-тест-системы используются также при диагностике инфекционных и соматических заболеваний. Существенную роль метод ПЦР играет в диагностике заболеваний, вызываемых возбудителями, бактериологическая идентификация которых не может быть проведена в связи с трудностями их выращивания на искусственных питательных средах, требующих разнообразных добавок или использования культур клеток. Применение мультиплексной ПЦР зачастую упрощает и ускоряет проведение анализов в области клинической диагностики. Например, мультиплексная ПЦР с обратной транскрипцией дает возможность исследовать костный мозг у пациентов с острым лимфолейкозом и острым миелолейкозом на наличие 29 хромосомных аберраций. Использование мультиплексной ПЦР позволило свести постановку к восьми параллельным реакциям ПЦР, что значительно уменьшило объем работ и количество реагентов. С помощью мультиплексной ПЦР можно одновременно обследовать до 10 пациентов в течение нескольких дней. В молекулярной биологии наиболее специфичными и чувствительными методами анализа являются различные модификации полимеразной цепной реакции. Важнейшей модификацией является мультиплексная ПЦР в реальном времени, которая позволяет проводить экспресс-диагностику сразу нескольких возбудителей различной этиологии. Мультиплексная ПЦР осуществляется по стандартной методике постановки полимеразной цепной реакции, единственное ее отличие состоит в этапе добавления праймеров: Использование данной модификации ПЦР является довольно перспективным как в области клинической диагностики, так и в лабораторных исследованиях, так как ее применение по сравнению со стандартной схемой ПЦР позволяет значительно уменьшить объем работ и количество затрачиваемых реагентов. Сибирское университетское издательство, Издательство Российского государственного педагогического университета имени А.
Посылай всех есенин стих
Результаты 90 дневной диеты фото
Разумовская 7 класс тесты
Полимеразная цепная реакция (ПЦР)
Стихи на тему свадьбы
Отправить письмо обратно
Европа супермаркет каталог
Полимеразная цепная реакция, ее сущность и области применения
Лечение перелома бедра у детей
Латекс полимерный материал
ПЦР (Полимеразная цепная реакция)
Очаговый нейродермит лечение
Лобня ленина 16 карта
Приложения к заявлению о выдаче судебного приказа
ПОЛИМЕРАЗНАЯ ЦЕПНАЯ РЕАКЦИЯ
Состав 285 ук рф